Extração dna vegetal

UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARÁ
CENTRO DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS
DEPARTAMENTO DE FITOTECNIA
MELHORAMENTO VEGETAL AC 479

ROTEIRO AULA PRÁTICA
(EXTRAÇÃO DE DNA DE TECIDOS VEGETAIS)

 RECOMENDAÇÕES:
1. Todos os alunos deverão ter cuidado com os materiais do laboratório.
2. Manter o laboratório sempre limpo e em ordem.

 OBJETIVOS DA AULA:
1. Conhecer os princípios básicos da extração de material genético a partir de tecidos vegetais;
2. Familiarizar-se com o material genético responsável pela transmissão dos caracteres nos organismos vivos.

INTRODUÇÃO: Para a análise do DNA de células eucarióticas, a primeira etapa importante é o seu isolamento. O procedimento a seguir é utilizado para extrair grandes quantidades de DNA a partir de tecidos vegetais tal como bulbo de cebola, morango, sementes de ervilhas, lentilhas, entre outras.
Na extração de DNA de células eucariontes, três passos são básicos:
1. Ruptura (física e química) das membranas celulares para liberação do material genético;
2. Desmembramento dos cromossomos em seus componentes básicos: DNA e proteínas;
3. Separação do DNA dos demais componentes celulares.

MATERIAIS:

Material vegetal: 4 morangos grandes (ou 6 pequenos);
Copo misturador;
Sacos plásticos;
Copo;
Coador;
Béquer, funil e papel de filtro (Filtro de café);
Provetas e tubos de ensaio;
Bastão de madeira

Solução Tampão:
Detergente neutro, incolor;
Sal de cozinha ou NaCl;
Água quente (~60 ºC);
Álcool etílico (etanol) ou isoproprílico (isopropanol).

PROCEDIMENTO:

1. Macere os frutos de morango picados em sacolas de plástico com o auxílio de um copo;
(REFLEXÃO: Por quê é necessário realizar a maceração do tecido vegetal?)

2. Dissolver 1 colher de chá de sal em 80 ml de água morna (pré-aquecida);
3. Colocar a solução preparada anteriormente no saco plástico contendo os morangos até cobrí-los; macerar mais um pouco e misturar bem;
4. Adicionar 1/4 (ou 20 ml) de detergente à solução e misturar bem;