Eletroforese

Relatório Dosagem de Proteína por Fotometria

Introdução

Fotometria
A espectrofotometria é um método de análises óptico usado em tarefas biológicas e físico-quimicas. O espectrofotômetro é um instrumento que permite comparar a radiação absorvida ou transmitida por uma solução que contém uma quantidade desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substância. Todas as substâncias podem absorver energia radiante, mesmo o vidro que parece completamente transparente absorve comprimentos de ondas que pertencem ao espectro visível. A água absorve fortemente na região do infravermelho. A absorção das radiações ultravioletas, visíveis e infravermelhas dependem das estruturas das moléculas, e é característica para cada substância química. Quando a luz atravessa uma substância, parte da energia é absorvida (absorbância): a energia radiante não pode produzir nenhum efeito sem ser absorvida. A cor das substâncias se deve a absorção (transmitância) de certos comprimentos de ondas da luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos nossos olhos apenas aqueles comprimentos de ondas não absorvidos.

Lei de Lambert
A Lei de Lambert é a fórmula que utiliza 3 fatores (o comprimento de onda escolhido, o percurso que o feixe de luz percorrerá na solução e da concentração do composto nessa solução) para se medir a Absorbância.
A = b.c

Onde:
A – Absorbância (envolve a relação entre intensidade de luz incidente, lo, e transmitida, lt):
A = log lo/lt
- absortividade molar (característica de cada substância), em unidades de L.(mol.cm)-1 b - Caminho óptico (percurso da luz monocromática na solução), em cm c - Concentração da substância em mol/L.

Objetivo

Determinação da concentração de uma solução em proteína aquosa por fotometria.
C1 = 0,8 mg = 0,2