DETERMINAÇÃO DA QUANTIDADE DE PROTEÍNAS PELO MÉTODO BIURETO

OBJETIVO
Este procedimento experimental tem como objetivo a determinação da quantidade de proteínas em uma amostra desconhecida através do Método de Biureto.
MÉTODO
O método do Biureto é utilizado para expressar a quantidade de proteínas existentes em uma amostra desconhecida. Essa quantidade deve-se à formação de complexos Cu-Proteínas, nos quais o Cobre (Cu) presente na solução do Biureto se junta às ligações peptídicas das proteínas, resultando na coloração azulada da mistura. A intensidade da cor da mistura está diretamente relacionada à quantidade de proteínas presente na amostra.

RESULTADOS
TABELA DOS VALORES DE ABSORBÂNCIA MEDIDOS:
TUBO
1ª MEDIDA
2ª MEDIDA
3ª MEDIDA
MÉDIA
B
0,019
-0,010
-0,009
0,000
1
0,064
0,042
0,037
0,047
2
0,072
0,109
0,121
0,100
3
0,163
0,143
0,182
0,162
4
0,220
0,207
0,174
0,213
A
0,137
0,145
0,197
0,148

TUBO B: BRANCO
TUBO 1:
5mg – 1ml X – 0,025ml X = 0,125mg

TUBO 2: 5mg – 1ml X – 0,050ml X = 0,250mg

TUBO A: AMOSTRA
TUBO 3:
5mg – 1ml X – 0,075ml X = 0,375mg

TUBO 4:
5mg – 1ml X – 0,1ml X = 0,500mg

CÁLCULOS DA QUANTIDADE DE PROTEÍNA DA AMOSTRA
1) MÉTODO MATEMÁTICO
Segundo a lei de Lambert-Beer, FATOR DE CALIBRAÇÃO (FC) é a relação da quantidade pela absorção de cada um dos pontos, ou seja, FC=Q/A.
FC 1:
FC=
FC=2,659mg

FC 3:
FC=
FC=2,314mg

FC 2:
FC=
FC= 2,5mg

FC 4:
FC =
FC= 2,347mg

Podemos obter o Fator de Calibração Médio (FCM), a média dos fatores individuais:
FCM = = 2,455mg
Tendo a média de Absorbância e a média do Fator de Calibração, podemos descobrir a concentração de proteína na amostra, através da Lei de Lambert-Beer.
FC =
2,455 =
Q = 0,363mg

0,363mg – 0,1ml X – 100 ml
X = 363mg/100ml

Como a concentração da amostra está diluída 20 vezes, faz-se:
363mg x 20 = 7260mg/100ml ou