Citoquimica

MÉTODOS DE ESTUDO EM BIOLOGIA
CELULAR
II - CITOQUÍMICA

Sistemas de estudos in vitro

Cultura
Fertilização
Manipulações

Estudos bioquímicos Preparações citológicas
Citoquímica
Autorradiografia
Imunocitoquímica
Célula
Tecido
Órgão

Análises in situ

Extrações/Purificações
Centrifugações
Diálises
Eletroforeses
Tecnologia do DNA/RNA

Métodos de Estudos in situ
Preparações Citológicas e Técnicas Citoquímicas
O estudo do material biológico ao Microscópio requer alguns procedimentos prévios que vão desde a escolha e coleta do material até a montagem final do preparado histológico

Que os elementos a ser analisados não sejam difusíveis;
Que o produto da reação seja visível
(cor
ou precipitado); Que a reação seja específica/seletiva para o que se pretende analisar

Princípios da
Citoquímica

Métodos de Estudos in situ
Preparações Citológicas e Técnicas Citoquímicas
O sucesso de uma reação citoquímica depende principalmente dos passos anteriores ao da reação de coloração:

Coleta do material
Fixação e agentes fixadores
Agentes desidratantes

Coleta do Material
Preparado permanente
Células preservadas para melhor demonstração de sua estrutura
Ideal = sejam mantidos estrutura e composição química quando in vivo
1) Montagem total:
•Material fino / transparente – na lâmina
• Fixação e coloração
• Vantagem: obtenção de células inteiras (medidas e quantificadas)

Mesentério
Glândulas de insetos
Membranas fetais

Glândulas Salivares de Rhodnius prolixus
Montagem total
Glândula
Principal

Glândula
Acessória

Ducto
Acessório
Ducto
Principal

Coleta do Material
2) Esfregaço: consistem em promover o espalhamento de células livres sobre a lâmina com o auxílio de outra lâmina
• Células livres: sangue, linfa, sêmen, líquor
• Fixação e coloração
• Vantagem: obtenção de células inteiras (medidas e quantificadas)

Coleta do Material
3) Espalhamento:
• Erroneamente esfregaço
• Raspagem (espátula / palitos) de camadas superficiais (mucosas)
Mucosas: bucal, anal, vaginal
• Fixação e