Cinética enzimática

Faculdade de Ciências e Tecnologia

2013/2014

Trabalho Prático Nº4

Análise dos resultados
A. Estudo do efeito da temperatura na atividade enzimática:
Temperatura
Teórica (ºC)
Temperatura
Real (ºC)
Absorvância
(430nm)
Velocidade
Reacção

5

20

30

40

50

60

70

80

8

20

30

39

49

61

70

80

0,072

0,175

0,276

0,457

0,587

0,051

0,025

0,021

3,55E-5

8,64E-5

1,36E-4

2,26E-4

2,90E-4

2,52E-5

1,23E-5

1,04E-5

A velocidade da reacção é calculada através da expressão que nos é fornecida no protocolo.
Utilizando os valores de absorvância calculados experimentalmente, podemos descobrir a velocidade da reacção, ou seja, a actividade da enzima a uma determinada temperatura, de acordo com o valor de absorvância. Este valor, o de velocidade, que representa a actividade enzimática, será o utilizado no gráfico em variação com a temperatura.

;

;

Actividade Vs Temperatura
Actividade (seg.mM-1)

0,00035
0,0003
0,00025
0,0002
0,00015
0,0001
0,00005
0
0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

Temperatura (ºC)
Através da análise da curva do gráfico, verificamos que na região onde as temperaturas são mais baixas, a actividade enzimática aumenta exponencialmente, de acordo com a lei de
Arrhenius. A temperaturas mais elevadas, após atingido o valor máximo de actividade, os valores caem abruptamente devido à desnaturação da enzima. Assim, podemos definir a temperatura óptima da enzima, ou seja, a temperatura onde a actividade atinge o seu valor máximo, sendo no caso específico desta enzima aproximadamente 47ºC.

Caracterização da enzima β-glucosidase

Bioquímica - Turno P5

Faculdade de Ciências e Tecnologia

2013/2014

Trabalho Prático Nº4

B. Estudo do efeito do pH na actividade enzimática:

1,25 2,15

PH real
Absorvância
(430nm)
Velocidade
Reacção

3,17

4,07 5,14

6,28

7,09

8,09 9,13

10,5

0,017