Celulases

1. Introdução
A celulose é um polímero de cadeia longa composto de um só monômero (glicose), classificado como polissacarídeo ou carboidrato. É um dos principais constituintes das paredes celulares das plantas, em combinação com a lignina com hemicelulose e pectina e não é digerível pelo homem, constituindo uma fibra dietética.
Celulases são enzimas que hidrolisam a ligação beta-1->4 nas celuloses, encontradas predominantemente nos procariotas e fungos. São tradicionalmente classificadas em endoglucanases, as que hidrolisam as ligações internas, exoglucanases, que hidrolisam as ligações internas e exoglucanases, que liberam sequencialmente moléculas de celobiose da cadeia de celulose e beta-glucosidades que hidrolisam moléculas de celobiose produzindo glicose (Uhling, H).

Objetivos:
Este trabalho teve por objetivo determinar a atividade da enzima celulase usando substrato carboximetilcelulase e verificar a ação das celulases nas polpas de maracujá, tomate, bagaço de cana e papel de filtro.

2. Materiais e métodos

2.1. Materiais

Polpa de maracujá ácido
Tomate
Pedaços de papel de filtro (com 1 cm de aresta)
Bagaço de cana
Tampão citrato-fosfato 0,05M pH 5,0
Celulase comercial
Solução de celulase (0,04 mL/mL)
Solução 0,5% de substrato CM-celulose em tampão citrato fosfato 0,05M pH 5,0.

2.2. Métodos

2.2.1. Determinação da atividade de celulase comercial

a) Numerar 2 tubos de ensaio: T1= “branco”, T2=Enzima (0,04 mL/mL)
b) Pipetar 4 mL de solução 0,5% de substrato CM-celulose em tampão citrato fosfato 0,05M com 2 tubos de ensaio numerados (T1= “branco”, T2=Enzima) e incubar em banho-maria a 40ºC por 10 minutos.
c) Adicionar 1 mL de solução de celulase (0,04 mL/mL) no tubo de ensaio 2. No tubo “branco” adicionar 1 mL de água destilada. Continuar incubando os tubos no banho-maria a 40ºC por 20 minutos
d) Após incubação transferir os tubos de ensaio para banho de gelo para interromper a reação.
e) Determinar os açucares redutores formados pelo método de