BROMATOLOGIA Trabalho Dpph

Determinação de antioxidantes ORAC, TRAP- Radical hidroxila
FRAP, CRUPAC-Redução do metal
DPPH, ABTS-Radicais orgânicos
TBARS, Oxidação de LDL-Peroxidação dos lipídios

DPPH

DPPH

Baseado em métodos indiretos para se determinar a atividade antioxidante

DPPH Descoberto por Goldschmidt e Renn em 1922

Baseado na captura do radical: 2,2-difenil-1picrilhidrazil(BRAND-WILLIANS, 1995)

DPPH

Materiais
Reagentes
Acetona P.A.
Ácool metílico P.A.
 Água destilada
DPPH (2,2-Diphenyl-1-picryl-hidrazil) (PM = 394,3) - Sigma, código 095K1452, ou equivalente

Equipamentos e vidrarias
Agitador de tubos de ensaio
Balança analítica
 Balão volumétrico 100 mL e 1.000 mL
Cronômetro digital
Cubetas de vidro (4 x 1 cm)
 Espectrofotômetro
 Pipeta automática (10 1000 µL)
Proveta de 50 mL
 Tubos de ensaio com tampa rosqueada (8 mL)

DPPH
1° passo: Preparar soluções para obtenção de

extrato do alimento.(Exemplo usado: fruta)
Solução1-Álcool metílico 50%- 1 H2O/0,5 álcool metílico Solução 2-Acetona 70%
Solução controle de água-100 ml H2O+40 ml álcool 50% + 40 ml aceton 70%

DPPH
2° passo-2,4 mg DPPH + álcool metílico até

completar 100 ml(0,06 mM)
3° passo- Extrato da fruta. (Pesar em um

béquer 100 ml. Adicionar metanol(álcool metílico) 50% e centrifugar por 15 minutos. Em seguida adicionar a acetona 70% e dixar descansando por 60 min. Centrifugar mais uma vez por 15 minutos e transferir o sobrenadante para o balão volumétrico(Larrauri et al. , 1997)

Determinação da atividade antioxidante total 4° passo: Preparar análise
Solução 1: 0,1 ml de extrato + 3,9 DPPH
Solução 2: Controle + 3,9 DPPH

Calibrar espectofotômetro, utilizndo álcool metílico como branco(515 nm)

Curva de absorvância ou de calibração

Obtenção de resultados
Observar tempo EC50 (Posteriormente já

poderá ser utilizado para determinado alimento sem ter de passar pelos processos anteriors a este) = mg/L fruta/g DPPH
Relacionar com reação controle

Referências bibliográficas
BRAND-WILIAMS,