Camundongos transgênicos

inserir proteínas exógenas de interesse em camundongos e examinar as conseqüências. A técnica mais comum consiste na microinjeção direta do gene de interesse no pró-núcleo de ovos fertilizados. Uma micropipeta de vidro contendo a solução de DNA (~2 pmol) é introduzida no prónúcleo de um ovo fertilizado. Os embriões são cultivados e reimplantados em uma fêmea. Os filhotes que receberam o gene de interesse (no máximo 40% dos filhotes) são identificados por “Southern Blot”: o DNA dos animais é extraído e fragmentado; os fragmentos de DNA são separados por eletroforese em gel, transferidos para uma membrana, e o gene de interesse é identificado por uma sonda marcada de RNA ou DNA complementar. No método de microinjeção pró-nuclear, a recombinação é não-homóloga, ou seja, ocorre ao acaso no genoma das células do animal (Fig. 1). [pic] Por ser aleatória, a integração do transgene ao DNA pode resultar na mutação de outro gene (e não do gene-alvo). Também há variações no número de cópias integradas e no nível de expressão do transgene, ou seja, na quantidade produzida da proteína correspondente. Além disso, como o gene-alvo continua intacto, não se sabe a priori como sua expressão será afetada pelo transgene. Isso exige a geração de várias linhagens independentes de animais com o mesmo transgene, para comparar o efeito no organismo de diferentes doses da proteína em estudo. Técnica de injeção de células tronco embrionária murina (ES) Um método alternativo…

ligases. Porém fragmentos grandes clonados em leveduras podem der modificados facilmente por recombinação homóloga na levedura hospedeira. Além do mais, leveduras são úteis para se clonar seqüências genômicas que não são clonadas eficientemente em Escherichia coli. Clonando seqüências genômicas em leveduras O desenvolvimento da clonagem em leveduras foi possível após a identificação dos principais elementos necessários para a propagação de cromossomos em leveduras: um…

entre as cromátides homólogas. Não ocorre permutação entre dois determinados genes em todas as células. Vejamos o que acontece se ocorrer permutação entre dois genes ligados - A e B -. Em 60% das células da linhagem germinativa. (figura) A permutação acontece entre as cromátides internas dos pares de cromossomos homólogos, enquanto nas cromátides externas mantém-se a ligação gênica original. Por isso, se em todas as células ocorresse permutação entre dois pares de alelos a proporção…

1. RECOMBINAÇÃO GENÉTICA Uma importante propriedade do DNA das células é a sua capacidade de sofrer rearranjos, que podem ocasionar desde novas combinações entre os genes presentes em qualquer genoma individual até alterações qualitativas e quantitativas na expressão desses genes. Trata-se de uma fonte de variação genética fundamental para permitir que os organismos evoluam em resposta a mudanças ambientais. Esses rearranjos do DNA são realizados pela recombinação genética. Duas…

transferência gênica, responda: a) Diferencie as estirpes F-, F+, Hfr. As bactérias frequentemente abrigam elementos de DNA que se replicam de maneira autônoma, alguns desses plasmídeos como os fatores de fertilidade (fator F). A fita doadora carrega o plasmídeo F (F+) enquanto os receptores são F-. O fator F, algumas vezes, se integra no cromossomo e como conseqüência mobiliza a transferência conjugativa do cromossomo hospedeiro para uma célula F-, uma linhagem contendo esse tipo…

MUTAÇ Alteração na sequência de nucleotídeos do DNA Alteraç nucleotí Tipos de Mutação: Mutaç a) Espontânea → Erro de replicação ou transcrição, falha no sistema de reparo replicaç transcriç b) Induzida → Agentes químicos, físicos ou biológicos quí fí bioló (i) Positiva → Benéfica ao organismo Bené (ii) Negativa → Deletéria ao organismo Deleté (iii) Silenciosa → Sem alterações fenotípicas alteraç fenotí 1) Pontual → Substituição, Inserção ou Deleção Substituiç…

alterações ambientais que outras macromoléculas. A sua estrutura, porém, não é estática no tempo. O DNA está constantemente sendo metabolizado, tanto para replicação quanto na transcrição, recombinação e reparo. Iremos aqui abordar a degradação, replicação, reparo e recombinação. A degradação do DNA é feita por nucleases, enzimas que degradam ácidos nucléicos. DNases e RNAses são tipos de nucleases específicas para DNA e RNA, respectivamente. Exonucleases degradam os ácidos nucléicos a…

Universidade Federal do Piauí Centro de Ciências da Saúde Departamento de Bioquímica e Farmacologia Disciplina: Bioquímica Metabolismo do DNA Introdução • Ácido desoxirribonucleico • Instruções genéticas coordenam o desenvolvimento e funcionamento de todos os seres vivos • Função: armazenar informações necessárias para a construção dos RNAs e das proteínas Replicação Reparo Recombinação Replicação Ocorre numa fase específica do ciclo celular…

sequência do gene alvo, residente no genoma do ratinho, por uma sequência relacionada modificada no laboratório para conter uma mutação. Primeiro, é isolado o gene seleccionado do DNA do ratinho, sendo de seguida transferido para uma amostra de DNA curta para fácil manipulação: o vector (2). Este consiste em duas regiões homólogas em cada extremidade, o gene de interesse mutado e dois genes adicionais para controlo de qualidade do processo. As regiões que se encontram em cada…

A ligação entre os genes pode ser incompleta, pois durante a prófase 1 da meiose, quando os cromossomos homólogos estão pareados, ocorrem trocas de partes entre as cromátides irmãs, num processo chamado crossing-over ou permutação. Essas trocas resultam na formação de gametas recombinantes, que são cromossomos com novas combinações de alelos. Se não houvesse recombinação nesses genes, a proporção de gametas formados por um duplo heterozigoto seria 50% AB e 50% ab. Quando há…