Camundongos transgênicos

Camundongos transgênicos

Animais transgênicos são aqueles que tiveram seu genoma alterado pelo recebimento de um gene de outra espécie. A tecnologia dos transgênicos permite inserir proteínas exógenas de interesse em camundongos e examinar as conseqüências. A técnica mais comum consiste na microinjeção direta do gene de interesse no pró-núcleo de ovos fertilizados. Uma micropipeta de vidro contendo a solução de DNA (~2 pmol) é introduzida no prónúcleo de um ovo fertilizado. Os embriões são cultivados e reimplantados em uma fêmea. Os filhotes que receberam o gene de interesse (no máximo 40% dos filhotes) são identificados por “Southern Blot”: o DNA dos animais é extraído e fragmentado; os fragmentos de DNA são separados por eletroforese em gel, transferidos para uma membrana, e o gene de interesse é identificado por uma sonda marcada de RNA ou DNA complementar. No método de microinjeção pró-nuclear, a recombinação é não-homóloga, ou seja, ocorre ao acaso no genoma das células do animal (Fig. 1).

[pic]

Por ser aleatória, a integração do transgene ao DNA pode resultar na mutação de outro gene (e não do gene-alvo). Também há variações no número de cópias integradas e no nível de expressão do transgene, ou seja, na quantidade produzida da proteína correspondente. Além disso, como o gene-alvo continua intacto, não se sabe a priori como sua expressão será afetada pelo transgene. Isso exige a geração de várias linhagens independentes de animais com o mesmo transgene, para comparar o efeito no organismo de diferentes doses da proteína em estudo.

Técnica de injeção de células tronco embrionária murina (ES)

Um método alternativo para introduzir genes estranhos ou seqüências alvo dos genes em camundongos consiste na utilização de células tronco embrionária murina (ES). Estas células são pluripotentes e podem ser proliferadas e diferenciadas em meio de cultura, ou serem incorporadas a um blastocisto de camundongo, que pode então ser implantado em uma