APLICAÇAO DO PCR

Postal 83, CEP: 13400-970 - Piracicaba - SP http://www.genetica.esalq.usp.br/semina.php EXPRESSÃO GÊNICA E DIAGNÓSTICOS. APLICAÇÕES DO PCR EM TEMPO REAL O PCR consiste em amplificar cópias de DNA “in vitro”, usando os elementos básicos do processo de replicação natural do DNA. É o método para rápida amplificação de seqüências específicas de DNA. A localização da seqüência alvo é feita pelos iniciadores, que são oligonucleotídeos com 20-24 bases usualmente seletivos o suficiente para localizar um sítio único em um genoma de alta complexidade. Cada uma das novas fitas de DNA extendidas a partir dos iniciadores serve como molde para a síntese de uma nova fita, isso garante o aumento exponencial do número de novas fitas. O PCR convencional não apresenta valores quantitativos, por isso foi desenvolvido o PCR em tempo real, que é uma técnica descrita como quantitativa porque consegue realizar a avaliação do número de moléculas produzidas a cada ciclo. As características relevantes do PCR em tempo real são rapidez, especificidade, sensibilidade e quantificação. A amplificação é dividida em 3 fases: a linha basal na qual não há produtos de PCR suficientes para detectar fluorescência, a fase log em que a quantidade de produtos de PCR dobra a cada ciclo e a fase platô onde não há mais aumento no número de produtos. No PCR em tempo real existem dois métodos de quantificação: a detecção não-específica e a específica. O Syber Green é o exemplo mais…

Vírus, bactérias ou células DNA alvo PCR bDNA “ primers” & enzimas Cópias (DNA) Adi Adicionar probes e “branched” “branched” DNA Biologia Molecular para o HBV Testes Utilizados Utilizados 1. Carga Viral – Kits comerciais Amplicor® HBV (Roche) – 60UI/mL – 38.000UI/mL bDNA® (Siemens) – 100UI/mL – linearidade de 357 a 1,78 X10 UI/mL X107 UI/mL Real Time PCR (COBAS® Ampliprep/ COBAS® Taqman – HBV Test- Roche) -12UI/mL –linearidade de 54,5 a 1,1 X108…

DE MANAUS IASMIN RODRIGUES BARACHO PCR EM TEMPO REAL MANAUS-AM 2015 IASMIN RODRIGUES BARACHO PCR EM TEMPO REAL MANAUS-AM 2015 SÚMARIO 1. INTRODUÇÃO.............................................................04 2. METODOLOGIA...........................................................05 3. CONCLUSÃO...............................................................07 4. REFERÊNCIAS............................................................08 …

PCR em tempo real Pesquisa Uma Inovação tecnológica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) Caroline Monteiro Novais Estudante do curso de farmácia do Centro Universitário de Barra Mansa. E-mail: carol_farmacia@hotmail.com Melissa Pires-Alves Doutora em Biologia Celular e Molecular pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Professora do Centro Universitário de Barra Mansa. E-mail: melalves@ig.com.br Colaborador Fábio Freitas Silva Introdução advento da…

Transplantes de órgãos...) Contaminações em IMUNOBIOLOGICOS TESTES GENETICOS - PCR e RT-PCR - REAL-TIME PCR - HIBRIDIZAÇÃO (SOUTHERN BLOT / DOT BLOT) - SEQUENCIAMENTO DO DNA - RFLP - PFGE - MICROCHIPS DE DNA PCR REAL-TIME PCR Técnica de PCR que usa reagentes fluorescentes para marcar o produto de reação, visando: 1.- Detectar ácidos nucléicos 2.- Diferenciar ácidos nucléicos 3.- Quantificar ácidos nucléicos ... e RAPIDAMENTE (em tempo real) !!! PORQUE “REAL-TIME”…

se chegar ao formato atual, passando pela biologia molecular manual e automatizada, abrangendo, basicamente, a PCR e a PCR tempo real. Além disso, foram discutidas e descritas brevemente outras técnicas de amplificação de ácidos nucleicos, amplificação de sinal e microarranjos. Por fim, foi apresentado um resumo das principais expectativas em relação ao diagnóstico molecular, considerando seu crescimento, o mercado de análises clínicas e as novas áreas e abordagens. Palavras-chave:…

PCR em tempo real Pesquisa Uma Inovação tecnológica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) Caroline Monteiro Novais Estudante do curso de farmácia do Centro Universitário de Barra Mansa. E-mail: carol_farmacia@hotmail.com Melissa Pires-Alves Doutora em Biologia Celular e Molecular pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Professora do Centro Universitário de Barra Mansa. E-mail: melalves@ig.com.br Colaborador Fábio Freitas Silva Introdução advento da…

REAÇÃO DA POLIMERASE EM CADEIA - PCR O QUE É PCR? 1. É uma metodologia que se baseia na amplificação exponencial seletiva de uma quantidade reduzida de DNA de uma única célula, sem o uso de um organismo vivo. HISTÓRICO 1. Karys Mullis descreveu a PCR no final da década de 1980. 2. Em 1989, a Hoffman La Roche & Perkin-Elmer Corporation patenteou este processo . 3. O Prêmio Nobel da Química foi atribuído à Karys Mullis pelo seu trabalho em 1993. 4. Atualmente, método PCR é usado…

danificadas) Fotorreativação (em dímeros de pirimidinas) Excisão de nucleotídeos Reparo de quebras de fita Síntese de DNA translesão TÉCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR 1. PCR convencional O PCR convencional consiste na amplificação de um fragmento de DNA. Ele é sintetizado milhões de vezes em poucas horas. Para a reação, são necessários: Fita molde de DNA, primers (que irão restringir o fragmento de interesse), nucleotídeos, um tampão, cloreto de magnésio e a enzima…

observada em imunocomprometidos, sendo a leucopenia, pneumonia, encefalite e problemas gastrointestinais complicações frequentemente observadas nesses pacientes (Fishman & Rubin, 1998; Yakushiji et al., 2002). A utilização de metodologias de diagnóstico que sejam sensíveis e específicas desempenha, assim, um papel essencial na prevenção durante o período pós-transplante, podendo contribuir significativamente para um melhor prognóstico para o paciente (Razonable et al., 2002; Kotton et…