Bio molecular

“Biologia molecular no diagnóstico de infecções virais”

Oscar Bruna Romero

PRINCIPIOS DA MICROBIOLOGIA CLINICA

1.- DETECTAR O PATÓGENO 2.- DETECTAR UM PRODUTO DO PATÓGENO 3.- DETECTAR UMA RESPOSTA IMUNE CONTRA O PATÓGENO

DETECÇÃO DE VÍRUS
1.- Microrganismo CULTIVO DE VÍRUS E EFEITO CITOPÁTICO Células em cultura (ID50) Ovos (ID50) Inoculação em camundongo (cerebro, peritoneo…) - DL50MICROSCÓPIO ELECTRÓNICO 2.-Produtos ou componentes do microrganismo AGLUTINAÇÃO DE HEMÁCIAS (HEMAGLUTINAÇÃO OU HA) IMUNOFLUORESCÊNCIA ELISA SANDWICH ANTIGENEMIA BIOLOGIA MOLECULAR 3.- Resposta imune contra o microrganismo INIBIÇÃO DA HA (Influenza, Dengue, Sarampo, ...) ELISA (SOROLOGIA IgM ou IgG)

DIAGNÓSTICO VIRAL POR BIOLOGIA MOLECULAR

VANTAGENS DA GENOTIPAGEM SOBRE FENOTIPAGEM -Alta capacidade de diferenciação (gênero/espécie/cepa, etc) -Capacidade de processamento de múltiplas amostras simultâneas. -Resultados em poucas horas. -Alta sensibilidade e especificidade para amostras com poucos microorganismos ou com mistura de microorganismos

A BIOLOGIA MOLECULAR PROCURA O PATÓGENO Presença/ausencia (Deteccão simples): CMV, EBV, HAV, VZV, Dengue, Adenovírus, HIV, HCV, HBV ou Influenza (suína, frango, outras) Outras utilidades: Genotipos virais (HCV) Cepas virais diferentes (Dengue 1,2,3,4) Cargas virais (HIV, Transplantes de órgãos...) Contaminações em IMUNOBIOLOGICOS

TESTES GENETICOS
- PCR e RT-PCR - REAL-TIME PCR - HIBRIDIZAÇÃO (SOUTHERN BLOT / DOT BLOT) - SEQUENCIAMENTO DO DNA - RFLP - PFGE - MICROCHIPS DE DNA

PCR

REAL-TIME PCR
Técnica de PCR que usa reagentes fluorescentes para marcar o produto de reação, visando:

1.- Detectar ácidos nucléicos 2.- Diferenciar ácidos nucléicos 3.- Quantificar ácidos nucléicos
... e RAPIDAMENTE (em tempo real) !!!

PORQUE “REAL-TIME” PCR E O QUE É QUE A MÁQUINA MEDE?

Ciclos do PCR

Marcagem do produto de PCR
1.- Corantes fluorescentes: EtBR, Sybr Green ... 2.- Sondas fluorescentes 3.- Iniciadores