Extração do dna e. coli

quantificação do DNA plasmídeo/vector de clonagem (pUC19) de uma estirpe de Escherichia coli. Este último constitui, por assim dizer o objectivo principal de todo o trabalho, já que as todas etapas anteriores foram realizadas com a finalidade de visualisarmos o DNA e de quantificarmos o seu tamanho. Para isso, realizaram-se os seguintes trabalhos/etapas:  TP1: Extrair, purificar, concentrar e quantificar o plasmídeo/vector de clonagem (pUC19) de uma estirpe de E.coli recorrendo à técnica da lise alcalina;  TP2: Extrair, purificar, concentrar e quantificar DNA cromossómico de uma estirpe de E.coli;  TP3: Restrição dos DNAs cromossómico e plasmídico e sua visualização em gel de agarose;  TP4: Visualização do DNA cromossómico e plasmídico por electroforese em gel de agarose (fotografia tirada no Laboratório Fernanda Galo) e quantificação do peso molecular. Para averiguar do grau de pureza das amostras de DNA preparadas nas primeiras etapas do trabalho laboratorial, mediram-se as respectivas absorvâncias para comprimentos de onde de 260 e 280 nm. Para uma amostra não contaminada com RNA, proteínas ou fenol, a razão entre as duas absorvâncias deverá estar compreendida no intervalo 1,9 – 2. Não foi o que se verificou no nosso trabalho. Para o DNA plasmídico a razão foi de 1, indicando grau de contaminação considerável. A concentração determinada para a amostra foi de 0,9 g DNA/L (usando como referência a relação empírica de que 1 Abs. (260 nm) > 50 g…

pTZ57R/T ligado a um fragmento de DNA de 953 pares de bases e realização de uma extração plasmidial a partir de uma colônia previamente preparada. 2. Introdução: 2.1. Processo de Clonagem do DNA in vivo: A tecnologia do DNA recombinante consiste em um conjunto de técnicas que permite identificar, isolar e multiplicar um gene interesse, tendo como objetivo determinar o seqüenciamento destes, sua atividade e consequentemente sua expressão gênica. Em suma, o processo de…

Extração e purificação de plasmídeos Introdução Os plasmídeos em procariotos, ou epissomos em eucariotos, são moléculas de DNA circular com capacidade de replicação independente e estável, mantendo seu número constante através de várias gerações, no estado não integrado ao cromossomo do hospedeiro. Os plasmídeos estringentes ocorrem em pequeno número de cópias por células, enquanto os relaxados em grande número de cópias por célula. Apesar de não serem indispensáveis à…

I - INTRODUÇÃO Os plasmídeos são porções de DNA extracromossomal encontrados em bactérias. Esses trechos de material genético possuem informações que, originalmente, não existiam nesses seres procariotos, sendo úteis para a sobrevivência em diferentes situações. A transferência horizontal gênica (THG) é a troca de material genético entre células ou genomas de espécies não relacionadas, ocorrendo em procariotos através da conjugação, transdução e, principalmente, a transformação…

Molecular 2.1 Tecnologia do DNA recombinante A clonagem é o procedimento na qual uma célula é isolada e sua reprodução possibilita a criação de uma população de células idênticas. Na clonagem do DNA ocorre o isolamento de um segmento específico de DNA que possui suas extremidades cortadas por uma enzima de restrição específica e um vetor de clonagem também é cortado por essa mesma enzima de restrição, possibilitando que essas moléculas cortadas possuam extremidades coesas. Após…

Dayane Ferreira Santos Determinação de um protocolo para análise de DNA em amostras do homogeneizado obtidas através do processo fermentativo utilizando E. coli para produção de pró-insulina humana recombinante Monografia apresentada ao Curso de Engenharia Química da Faculdade de Ciência e Tecnologia de Montes Claros, como parte dos requisitos para obtenção do diploma de Engenheiro Químico. Orientador: Prof. William James Nogueira…

DETECÇÃO DE ESCHERICHIA COLI 0157:H7 INOCULADA EXPERIMENTALMENTE EM AMOSTRAS DE LEITE CRU POR METODO CONVENCIONAL Técnica: PCR Multiplex Escherichia Coli Detecção de Escherichia coli 0157:H7 inoculada experimentalmente em amostras de leite cru por método convencional e PCR Multiplex. Objetivo: Padronizar um método de PCR Multiplex para Detecção de E. coli 0157:H7 e avaliar a eficiência dessa técnica. Grupo: EHEC ( E. coli entero-hemorragica), causa surtos de Colite Hemorrágica (CH)…

arabica (L.) em uma bactéria E. coli através de métodos rotineiros e com auxílio de quites comerciais. A análise de produtos de PCR por eletroforese em gel de agarose confirmou a presença do transgene em culturas bacterianas. 2. INTRODUÇÃO A clonagem gênica é uma ferramenta fundamental para a biologia molecular. A técnica consiste na transferência artificial de um gene de um organismo para outro, de modo que o DNA inserido possa ser replicado naturalmente neste novo organismo, bem como…

genes clonados. Técnica de DNA recombinante.  PROTEÍNAS RECOMBINANTES  Benefícios em várias áreas: - saúde; - biologia; - bioquímica; - microbiologia; - genética; - biotecnologia; - agricultura. PROTEÍNAS RECOMBINANTES  - Aplicação: Exemplo: Terapia Gênica Introdução de um gene num organismo e conseqüente correção de doenças genéticas. PROTEÍNAS RECOMBINANTES - Melhoramento animal e vegetal Plantas resistentes a pragas e a diferentes meios nutritivos.…

O DNA como material genético, replicação, transcrição e tradução Disciplina Fundamentos de zoologia, embriologia e genética - OCN 7003 Prof:Giorgini A. Venturieri – Eng. Agro. PhD O que é o DNA ?  ADN é a abreviatura de ácido desoxirribonucleico (em inglês, DNA: Deoxyribonucleic Acid) Como descobriram que ele era o material genético ?  A transformação genética  1928 – Frederick Griffith estudou a “transformação” de cepas da bactéria Diploccocus…