GENIARA

DETECÇÃO DE ESCHERICHIA COLI 0157:H7
INOCULADA EXPERIMENTALMENTE EM
AMOSTRAS DE LEITE CRU POR METODO
CONVENCIONAL

Técnica: PCR Multiplex

Escherichia Coli

Detecção de Escherichia coli 0157:H7 inoculada experimentalmente em amostras de leite cru por método convencional e PCR Multiplex.
Objetivo: Padronizar um método de PCR Multiplex para Detecção de E. coli
0157:H7 e avaliar a eficiência dessa técnica.
Grupo: EHEC ( E. coli entero-hemorragica), causa surtos de Colite Hemorrágica
(CH) e Síndrome Hemolítica Uremica (SHU).
Presente no intestino de animais domésticos e selvagens. Produzem toxinas
SHIGA (STX) devido a semelhança com a toxina produzida por Shiguella
Dysenteriae.
Patogeno : Causa DTA. Risco a saúde pode ser até fatal principalmente para crianças e idosos.

Material e Métodos


Material
20 estirpes de Escherichia coli e 14 Pertencentes a outros gêneros bacterianos



Métodos
Extração de DNA microbiano: cultura em meio liquido caldo enriquecedor,
DNA extraído pelo método fenol- clorofórmio e pela lise térmica. DNA foi quantificado em espectrofotômetro e a concentração foi ajustada para 20
Ng/ul.
Cultivo Convencional em meio de Cultura com amostras de leite estéril e leite cru cm alta contagem Bacteriana Total.

Primers
Primes Testados Para E. coli
RfbF
5'-GTGTCCATTTATACGGACATCCATG-3' e RfbR
5'CCTATAACGTCATGCCAATATTGCC-3' gene rfbE, produto amplificado de 292 pb;
FLICh7-F
5'-GCGCTGTCGAGTCTATCGAGC-3' e FLICh7-R
5'CAACGGTGACTTATCGCCATTCC-3' gene fliC (625 pb);
SLT-1F
5'-TGTAACTGGAAAGGTGGAGTATAC-3' e GCTATTCTGAGTCAACGAAAAATAAC-3' gene slt1 (210 pb);
SLT-IIF
5'-GTTTTTCTTCGGTATCCTATTCCG-3'
GATGCATCTCTGGTCATTGTATTA C-3' gene slt2 (484 pb).

e

SLT-1R

5'-

SLT-IIR

5'-

Genes rfbE e fliC biossíntese dos antígenos
O157
e
H7,
os genes slt1 e slt2 codificam toxinas semelhantes àquelas produzidas por Shigelladysenteriae e estão presentes no grupo de E. coli denominado STEC
(Shiga-toxin E. coli).

PCR Multiplex
Amplificação de mais de um segmento genomico.