Clonagem do genica em Coffea arabica (L.)

Clonagem do genica em Coffea arabica (L.)

1. RESUMO
Tanto a clonagem de genes quanto a transformação bacteriana são técnicas fundamentais para a biologia molecular. Elas possibilitaram o desenvolvimento de produtos de extrema importância para o homem, além de auxiliarem nos estudos genéticos (Brasileiro & Carneiro. 1998). Com o propósito de instruir o aluno nessas técnicas foi realizada a clonagem do gene MT1 de Coffea arabica (L.) em uma bactéria E. coli através de métodos rotineiros e com auxílio de quites comerciais. A análise de produtos de PCR por eletroforese em gel de agarose confirmou a presença do transgene em culturas bacterianas.
2. INTRODUÇÃO
A clonagem gênica é uma ferramenta fundamental para a biologia molecular. A técnica consiste na transferência artificial de um gene de um organismo para outro, de modo que o DNA inserido possa ser replicado naturalmente neste novo organismo, bem como em sua descendência (Brasileiro & Carneiro. 1998).
O primeiro experimento bem sucedido de união entre dois fragmentos de DNA de espécies diferentes foi realizado em 1972 por Paul Berg e colaboradores. Eles conseguiram unir genes da bactéria E. coli ao código genético de um vírus SV40 (Berg et al. 1972). Tal experimento inaugurou a era da tecnologia do DNA recombinante, possibilitando grandes avanços científicos. Até então, a forma de se manipular geneticamente um organismo era através do cruzamento de indivíduos da mesma espécie com o propósito de selecionar caracteres melhorados (Miranda et al. 2009). Tal abordagem levou a um grande aumento da produtividade mundial de alimentos, mas não permitia a introdução de novas características (Gepts, 2002). Por outro lado, a versatilidade da clonagem permitiu o desenvolvimento de uma série de produtos importantes para o homem, como o caso da produção de insulina através da inserção de genes humanos em bactérias E. coli (Johnson. 1989).
A clonagem de genes envolve o uso de diversas técnicas, sendo a primeira a extração