Extra O DNA E Eletroforese

Extração de DNA e Técnica de Eletroforese Extração de ácidos nucléicos Requerimento essencial: • quantidade • pureza • integridade Etapas na obtenção de ácidos nucléicos: • Lise física ou bioquímica das paredes celulares e membranas • Purificação dos ácidos nucléicos: desnaturação / inativação de proteínas celulares • Precipitação Extração de ácidos nucléicos 1. Rompendo membranas celulares Lise das células  liberação dos componentes citoplasmáticos e/ou nucleares - bactérias (parede glicoproteica)  tratamento inicial com lisozimas (orifícios na parede  enfraquecimento  rompimento em solução hipotônica); outras soluções alternativas: temperatura elevada; sonificação Extração de ácidos nucléicos Células de plantas ou animais presentes em tecidos: • • Pré tratamentos adicionais para romper a matriz tecidual  célula individual  lise: digestão enzimática / homogeneização Célula vegetal – parede celular: tratamento mecânico para promover lise. Extração de ácidos nucléicos Células sem cobertura externa ou em solução: Sem tratamentos agressivos – tratamento com detergente SDS (SODIUM DODECYL SULFATE) – dodecil sulfato de sódio  substâncias tenso ativas que agem dissociando as proteínas dos ácidos nucleicos e dissolvendo proteínas de membranas solução de lise: NH4Cl / NH4HCO3 2. Desnaturando proteínas celulares: Lisados celulares contêm mistura complexa de macromoléculas: - DNA / RNA; proteínas, lipídeos, carboidratos. Fragmentos de membrana lipídica…

BIOLOGIA MOLECULAR Purificação de DNA: 1. Preparação de DNA celular total: a) As células bacterianas são cultivadas = Os dois principais meios de cultura são M9 e LB (luria-bertani) M9 = Meio de cultura definido no qual todos os componentes são conhecidos. Mistura de nutrientes inorgânicos para prover elementos essenciais como nitrogênio, magnésio e cálcio. Bem como glicose. (a definição dos elementos depende da espécie cultivada) LB = É…

Novembro de 2011 Introdução O isolamento de DNA de plantas e de material vegetal proveniente de cultura de tecidos é uma etapa importante na análise da estrutura e organização do genoma de plantas. Preparações de DNA vegetal também são, comumente, utilizadas como substratos em reações de PCR para estudos filogenéticos ou no desenvolvimento de marcadores moleculares como os microsatélites e os gerados por RAPD. Independente do tipo de estudo molecular, as preparações de DNA devem…

OBJETIVOS A prática tem por objetivo purificar DNA plasmidial, separando-o do DNA cromossômico, para então estimar a quantidade de plasmídeo purificada e mensurar o tamanho, em pares de base, do fragmento de DNA inserido entre os sítios de enzima de restrição EcoRI. DISCUSSÃO DOS RESULTADOS 1. Analise o resultado do gel indicando a presença de bandas correspondentes ao plasmídeo, a presença de RNA na amostra e de possíveis contaminantes, como por ex., fragmentos de DNA cromossômico. …

1: Análise de DNA Por Eletroforese em Gel de Agarose INTRODUÇÃO As endonucleases de restrição, ou enzimas de restrição, tem a função de clivagem (corte) da molécula de DNA em um determinado ponto especifico, em reconhecimento a determinadas sequencias de nucleotídeos. Estas sequencias são de 4 a 8 nucleotídeos, havendo algumas enzimas que reconhecem sequencias maiores que estas. O DNA formado a partir destas enzimas de restrição possui variados tamanhos. A técnica de separação…

espectrofotometria, do DNA genómico de células hepáticas de um ratinho descendente do cruzamento entre heterozigóticos relativamente ao gene Drg11 para posterior amplificação por PCR de fragmentos de DNA correspondentes ao gene supracitado e ao gene reporte LacZ e análise por eletroforese de modo a determinar o seu genótipo. Métodos • Extração e quantificação do DNA genómico 1- Escolheu-se 1 tubo (caixa a -20ºC) com uma porção de fígado de ratinho, macerou-se o tecido, o melhor…

CARMEN LUCIA ROCHA UTILIZAÇÃO DA ANÁLISE DO PERFIL DE FRAGMENTAÇÃO DO DNA GENÔMICO POR ELETROFORESE EM GEL DE CAMPO PULSADO PARA AUXILIAR NA INTERPRETAÇÃO DO ENSAIO DE ESTERILIDADE MESTRADO PROFISSIONAL PPGVS/NCQS FIOCRUZ 2008 UTILIZAÇÃO DA ANÁLISE DO PERFIL DE FRAGMENTAÇÃO DO DNA GENÔMICO POR ELETROFORESE EM GEL DE CAMPO PULSADO PARA AUXILIAR NA INTERPRETAÇÃO DO ENSAIO DE ESTERILIDADE Carmen Lucia…

ELETROFORESE A Eletroforese, ferramenta amplamente utilizada no meio científico, é uma técnica baseada na separação de partículas em um determinado gel de acordo com sua massa e carga.. A eletroforese pode ser utilizada para separação de diversas moléculas orgânicas, como lipoproteínas, proteínas, RNA e DNA. O princípio da eletroforese utilizada para separação de DNA se baseia na carga negativa global de uma fita de DNA. Portanto, íons livres , moléculas de DNA ou fragmentos de DNA em…

INTRODUÇÃO Extração de DNA A extração de DNA é o primeiro passo para utilizá-lo em técnicas moleculares. Assim sendo, a qualidade e integridade do DNA são fundamentais para o sucesso nas etapas posteriores. Existem diferentes protocolos de extração de DNA que variam em função da espécie e do tecido a ser utilizado. A maneira de coletar e acondicionar o tecido, assim como o estado do mesmo é fundamental para o sucesso da extração. Um dos aspectos importantes é que a quantidade de DNA…

O que é eletroforese e para que é usada? ABR 10 Publicado por Moderador Gel de eletroforese. Note as bandas marcadas (Foto: PNNL - Pacific Northwest National Laboratory) A eletroforese em gel é uma técnica usada para separar moléculas com tamanhos e cargas diferentes. Ela é bastante útil quando queremos analisar o tamanho das moléculas obtidas ou checar o resultado de uma amplificação de DNA. Basicamente consiste em aplicar um gel que servirá como matriz (algo semelhante à…