Western blotting

1- Introdução

Western blotting (WB) também conhecido como protein blotting ou immunoblotting, é um poderoso e importante método utilizado para imunodetecção de proteínas após a separação destas por eletroforese em gel e transferência para membrana adsorvente. Esta técnica permite detectar, caracterizar e quantificar múltiplas proteínas, principalmente aquelas que estão em baixas quantidades em determinada amostra. A técnica de WB oferece as seguintes vantagens: membranas úmidas são maleáveis e de fácil manuseio; as proteínas imobilizadas na membrana são rapidamente e uniformemente acessíveis a diferentes ligantes; somente uma pequena quantidade de reagentes são necessários para a análise de transferência; é possível fazer múltiplas réplicas do gel; o armazenamento da amostra transferida pode ser prolongado, antes de ser usada e a mesma proteína transferida pode ser usada para múltiplas análises sucessivas. Além disso, em estudos relacionados à detecção de anticorpos e proteínas de agentes infecciosos, este método é considerado altamente sensível e específico, sendo o método de eleição para diagnóstico de inúmeras doenças dos animais.
O protocolo básico de WB pode ser resumido nos seguintes passos: preparação das amostras e fracionamento de proteínas, execução da eletroforese em gel, transferência das proteínas separadas do gel para uma membrana adsorvente, bloqueio de ligações inespecíficas, adição de anticorpo específico e detecção da reação.
A preparação da amostra é um dos passos importantes para o processo de separação de proteínas, pois o resultado do experimento depende da preparação cuidadosa das amostras, evitando contaminantes no qual pode afetar a credibilidade do método. Tecidos, culturas celulares e fluídos corporais, como plasma ou liquido cefalorraquidiano (LCR) são usados como fonte de proteínas. Além disso, podem ser estudadas, também, proteínas de bactérias, vírus e outros agentes infecciosos. A amostra de proteínas que será aplicada no