Westerning Bloting

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos
Departamento de Ciências Básicas

Aula Prática 02 – Bioquímica Fundamental (ZAB0361)
Western Blotting

Mariana Brustello

Professor Doutor Marcelo de Cerqueira Cesar

Pirassununga – SP
Maio/2014
1. Sumário
1. Resumo 1
2. Introdução 1
3. Materiais 6
4.Metodologia 6
4.1 Preparo da amostra do músculo do peixe 6 4.2 Protocolo de transferência do método de Western Blotting...........................6 4.3 Preparo para detecção da proteína de interesse no método de Western Blotting.....................................................................................................................7
5. Resultados e Discussões 8
6. Conclusão 14
7. Referências Bibliográficas 14

1. Resumo
O Western Blotting (WB) é um método de alta sensibilidade e especificidade utilizado para identificação de proteínas de tecidos biológicos através da imunoidentificação. Essas proteínas são separadas por eletroforese em gel, onde as proteínas presentes nos tecidos são transferidas para o gel. Após esta etapa, as proteínas do gel passam para uma membrana de nitrocelulose, a partir do mesmo princípio da eletroforese. Em seguida, é adicionado o anticorpo primário específico para a proteína de interesse a ser identificada, neste caso a miosina de cadeia leve. Também é adicionado um anticorpo secundário a membrana, que se ligará ao anticorpo primário. O anticorpo secundário normalmente esta anexado a uma enzima reveladora, que ao entrar em contato com o reagente de cor, adicionado em seguida a membrana, proporciona uma reação de cor revelando a existência ou não da proteína de interesse.

2. Introdução A técnica de Western Blotting (WB) foi desenvolvida no laboratório do Prof.º George Stark na Universidade de Stanford. O nome Western Blotting foi dado por W. Neal Burnette, e é um trocadilho para o nome Southern Blotting, técnica para detecção de DNA