Trabalho

Silenciamento gênico por siRNA

Correção

Aluna: Marina Campos Rocha
Professora: Heloísa Sobreiro Selistre de Araújo

06/11/2011

Técnica de silenciamento por RNA
Pretendo silenciar o gene alb1, este gene está envolvido na síntese de melanina, a melanina é um mecanismo de proteção da parece celular do Aspergillus fumigatus impedindo a ação de drogas.
Para isto vou sintetizar um RNAi, atrvés de uma região região do mRNA alvo e vou evitar que a região escolhida tenha similaridade com regiões pertencentes a outros RNAs não relacionados. O siRna será gerado por digestão de dsRNA longos com a enzima Dicer.
Após a contrução da sequûencia do siRNA, vou inseri-la no Aspergillus fumigatus por tranformação de acordo com o protocolo realizado por Osmani; May; Morris, 1987.
Para confirmar o silenciamento gênico vou realizar testes fenotípicos, com drogas que estejam relacionadas a aquele gene e através de diferenças na morfologia verificarei.
Um siRNA é considerado eficiente quando provoca uma redução de pelo menos 90% no nível protéico, então atreves de análises na morfologia verificarei se houve uma redução em relação aos níveis de melanina no Aspergillus fumigatus.
Referências
Mittal V. Improving the efficiency of RNA interference in mammals. Nat Rev Genet 2004;5(5):355-65.
Elbashir SM, Lendeckel W, Tuschl T. RNA interference is mediated by 21- and 22-nucleotide RNAs. Genes Dev 2001;15(2):188-200. Bernstein E, Caudy AA, Hammond SM, Hannon GJ. Role for a bidentate ribonuclease in the initiation step of RNA interference. Nature 2001;409(6818):363-6.
Nykanen A, Haley B, Zamore PD. ATP requirements and small interfering RNA structure in the RNA interference pathway. Cell 2001;107(3):309-21.
Martinez J, Patkaniowska A, Urlaub H, Luhrmann R, Tuschl T. Single-stranded antisense siRNAs guide target RNA cleavage in RNAi. Cell 2002;110(5):563-74.
OSMANI, S. A., G. S. MAY and N. R. MORRIS, 1987 Regulation of the mRNA levels