Roteiro Contagem de Estafilococos coagulase positivo

Contagem de Estafilococos coagulase positivo

Equipamentos
Materiais
Meios/caldos autoclave; estufa bacteriológica; estufa de esterilização e secagem; balança. alça de Drigalsky; tubo de ensaio; estante para tubo de ensaio; pipetas graduadas de 1 e 10mL; bico de Bunsen; placas de Petri.
Diluente: água peptonada 0,1%;
Ágar Baird-Parker (BP).

a. Preparação da amostra.
b. Homogeneização e preparo das diluições seriadas.
c. Inoculação: selecionar três diluições adequadas da amostra. Inocular 0,1 mL de cada diluição na superfície de placas de Ágar Baird-Parker (BP), previamente preparadas e secadas. Espalhar o inóculo com uma alça de Drigalsky, até que todo excesso de líquido seja absorvido;
d. Incubação: Aguardar que as placas sequem completamente e incubar invertidas a 35°C por 48 horas;
e. Contagem de colônias presuntivas: selecionar placas com 20 a 200 colônias e contar as colônias típicas de S.aureus: colônias circulares, pretas, pequenas (máximo 1,5mm em diâmetro), lisas, convexas, com bordas perfeitas, massa de células esbranquiçada nas bordas, rodeadas por uma zona opaca e/ou um halo transparente se estendendo para além da zona opaca.
f. Confirmação das colônias típicas:
- Teste de coagulase
- Teste de termonuclease
- Teste de catalase
g. Cálculo dos resultados: UFC/g ou mL em função do número de colônias típicas, diluição inoculada e percentagem de colônias confirmadas.

Resultados: comparar quanto à tolerância para amostra indicativa na Resolução da ANVISA – RDC nº 12 de janeiro de 2001- REGULAMENTO TÉCNICO SOBRE PADRÕES MICROBIOLÓGICOS PARA ALIMENTOS.

Referência

SILVA, N. da; et al. Manual de métodos de análise microbiológica de alimentos. 3. Ed. São Paulo: Varela, 2007. 552p.