pratica de DNA

MÓDULO: PROCESSOS BIOLÓGICOS

ROTEIRO DA ATIVIDADE PRÁTICA

1. EXTRAÇÃO DE DNA

Informações técnicas

A extração de DNA de células eucariontes consta de três etapas principais:
a) Ruptura das células para liberação dos núcleos;
b) Desmembramento dos cromossomos em seus componentes básicos: DNA e proteínas;
c) Separação do DNA dos demais componentes celulares.
O detergente desintegra os núcleos e os cromossomos das células do morango, liberando o DNA. Um dos componentes do detergente, o duodecil (ou lauril) sulfato de sódio, desnatura as proteínas, separando-as do DNA cromossômico.
O álcool gelado, em ambiente salino, faz com que as moléculas de DNA se aglutinem, formando uma massa filamentosa e esbranquiçada.
Material
2 morangos
35 mL de solução de extração (1mL de detergente concentrado +: 70 mL H2O + 10 g NaCl) Etanol 95% gelado 2 béqueres de 250 mL 1 proveta de 100 mL
Bastão de vidro fino e médio (ou palitos de sorvete)
Peneira
Banho-Maria a 60 0C Gelo moído em isopor (um por grupo ou isopores grandes comunitários)

Equipamentos necessários Banho-Maria a 60 0C
Procedimento
1- Macerar os morangos
2- Misturar aos morangos a solução de extração e levar ao banho Maria por 15 min.;
3- Retirar a mistura do banho e resfriar rapidamente colocando o béquer no banho de gelo por 5 min;
4- Coar a mistura na peneira e recolher o filtrado em um béquer limpo;
5- Adicionar ao filtrado, dois volumes de etanol gelado, deixando escorrer vagarosamente pela borda. Observar que se formam duas fases, a superior alcoólica e a inferior aquosa e que o DNA precipita na interfase.
6- Mergulhar o bastão no béquer e, com movimentos circulares, misturar as fases. Formam-se fios esbranquiçados, que são aglomerados de moléculas de DNA.