Padronização H2SO4

Aplicação de enzimas no pré-tratamento de um substrato

Enzimas
As enzimas utilizadas são Celluclast 1.5L e Novozyme 188 da empresa Novozymes, cedidas pela Dra. Susana Marques (ext. 4200 - LNEG). Estas tem actividade celulolíticas e hemicelulolíticas.
Para calcular o volume necessário de cada uma das enzimas é necessário conhecer o teor de Sólidos totais do substrato, já que:
-Celluclast 1.5L – 0,5ml/g sólidos (base matéria seca);
-Novozyme 188 – 0,1ml/g sólidos (base matéria seca);
OBS: As enzimas devem ser conservadas à aproximadamente 4ºC.

Aplicação das enzimas
A incubação das enzimas com o substrato deve ser realizada a 50ºC em solução tampão de citrato de sódio 0,1 M - pH5,5 de 48 à 72h.
No caso da actividade realizada pelo estagiário João Barbosa a duração efectiva da incubação foi de 50h e adicionou-se solução tampão até que está cobrisse a amostra e posteriormente, o volume de enzimas calculado.
Após a incubação, não foi realizado nenhum tipo de processo de retirada das enzimas, ou seja, adicionou-se no digestor o produto total da incubação.
Neste caso é necessário ter em consideração que a produção de biogás obtida se deverá também às enzimas, por isso, pode ser interessante realizar um branco com enzimas, para verificar qual é a produção de biogás devido a estas.
Solução tampão de Citrato de Sódio
(para preparação da enzimas Celluclast e Novozyme) A solução tampão de citrato de sódio (C6H5Na3O7) 0,1M é composta por:
*Ácido cítrico (C6H8O7), massa molar 258,06 g/mol
*Citrato de sódio (Na3C6H5O7); massa molar 192, 12 g/mol
O ácido e a base devem ser preparados com o dobro da concentração, ou seja, C6H8O7 - 0,02M e Na3C6H5O7 - 0,02 M.
Sugere-se a preparação de 500ml de ácido e de base, sendo o material necessário:
- 2 balões volumétricos de 500ml;
- 1 balão volumétrico de 1000ml;
-19,2g de citrato de sódio, tendo em conta que 0,2 mol/l, então em 500ml temos 0,1 mol;
-25,8g de ácido cítrico, tendo em conta que a concetração