metodo de sanger

Introdução ao seqüenciamento de DNA
Seqüenciamento de DNA Existem duas maneiras para seqüenciar o DNA, ou seja, obter a ordem correta de bases nitrogenadas (A, T, C, G) componentes de um fragmento escolhido. Os dois métodos utilizados atualmente são: 1) seqüenciamento manual; 2) seqüenciamento automático. Como o seqüenciamento manual é mais trabalhoso e está em desuso (apesar do princípio ser o mesmo), descreveremos somente o automático. Tendo a seqüência de bases em mãos é possível pesquisar diversos dados como, por exemplo, conhecer a seqüência de um gene, isolar este gene, obter proteínas codificadas por este gene etc. Estes exemplos são os mais triviais. O grande sonho da pesquisa dos genomas é desvendar por completo processos vitais cujos mecanismos existem devido a pequenas ferramentas que são as proteínas. A pesquisa futura das proteínas será realizada em grandes projetos chamados “Proteoma”. (Cientistas afirmam que dentre os 40 a 100 mil genes presentes no ser humano, apenas 3% correspondem a genes estruturais, ou seja, genes que codificam proteínas; os outros 97% são considerados "lixo" da evolução do genoma humano e provavelmente teriam a função de regular a ação dos genes.)

Passos Gerais para Seqüenciar o DNA
1) O DNA do núcleo de células é extraído por técnicas especiais. O DNA puro é então cortado em vários pedaços utilizando enzimas de restrição. Estas enzimas são muito específicas, isto é, cortam o DNA em locais conhecidos.
2) Estes pedaços de DNA possuem as pontas conhecidas, pois foram cortados com enzimas conhecidas. As mesmas enzimas são utilizadas para cortar os plasmídios, que são DNA em forma de pequenos círculos. São fáceis de manipular porque, além de pequenos, possuem uma seqüência já determinada previamente. Assim, com o uso de outras enzimas, chamadas ligases, as pontas são unidas: ponta “A” liga-se com ponta “A” e ponta “B” liga-se com ponta “B”.
3) Este DNA “empacotado” deste jeito é usado como molde em uma reação química para