Imunologia - ELisa

UNIVERSIDADE FEDERAL DO VALE DO SÃO FRANCISCO
Leela Morená
TESTE DE ELISA
Em que consiste o teste de ELISA?
ELISA é sigla para o termo Enzime-Linked Immunosorbent Assay, que significa “Ensaio Imunossorvente Ligado à Enzima”. Esse teste baseia-se reações antígeno-anticorpo detectáveis por meio de reações enzimáticas (teste imunoenzimático).Logo, o ensaio é um teste sorológico comum para a presença de antígenos ou anticorpos específicos. Existem dois tipos deste ensaio: o ELISA direto que utiliza de anticorpos monoclonais para detectar a presença de um antígeno particular em uma amostra; e o ELISA indireto que é usado para determinar a presença de um anticorpo específico em uma amostra.
Como se procede os dois tipos de ELISA?

1. ELISA-DIRETO No método ELISA-DIRETO, um anticorpo monoclonal específico é primeiro preso nas paredes de uma placa de microtitulação. Logo, uma suspensão de soro ou outro fluido é adicionado para testar a presença de um antígeno complementar. Se o antígeno estiver presente na amostra, estes irão ligar-se à parede do poço. A ligação do antígeno ao anticorpo é forte o suficiente para resistir à lavagem que remove os antígenos não ligados do fluido. Depois da remoção dos antígenos não ligados, é adicionada outra parte de uma alíquota contendo anticorpos que contém uma enzima modificada, conhecida como reporter enzyme. Esta é responsável por uma mudança na coloração quando reage com o antígeno preso à parede da placa de microtitulação.
A amostra é novamente lavada para remover qualquer anticorpo não ligado. Se o antígeno está presente, forma-se um complexo que inclui o anticorpo preso na parede do poço, o antígeno e o anticorpo conjugado à enzima. Se o antígeno não está presente, o anticorpo conjugado à enzima é retirado no enxágue. Após a segunda lavagem é adicionado um substrato para a enzima ligada ao anticorpo, esse substrato ao reagir com a enzima provoca a mudança na coloração do fluido. A mudança de cor, então, revela a