Teste de Elisa Imunologia

ELISA “Enzyme Linked Immunosorbent Assay”

“Ensaio de imunoadsorção

enzimática”

O método ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay), é ensaio enzimático ligado a enzima, utiliza antígeno fixado em placa e logo em seguida é incubado o soro do qual se deseja testar a presença de anticorpos que,entrar em contato com um segundo anticorpo antiimunoglobulina marcado com enzimas (DIAZ, 1988).
O ELISA foi inicialmente desenvolvido por Engvall & Perlman e por van
Weeman & Schuurs.
Segundo Soares (2001) o teste ELISA é uma reação sorológica baseada no uso de antígenos e anticorpos marcados com enzimas ,na qual o complexo resultante possui ativade imunológica e enzimática.Por estar um de seus componentes (antígeno ou anticorpo) marcado com uma enzima e ligado a um suporte imunoadsorvente ,o complexo formado tora-se imobilizado. Desta forma ,com a adição de um substrato cromogenico especifico para a enzima,ocorrerá o desenvolvimento e/ou mensurado com o auxilio de um fotocolorimetro ou de um espectrofotômetro.
O autor citado anteriormente alega que o teste de ELISA pode ser diferenciado pela sua aplicabilidade e reagente marcado:
ELISA Direto
O antígeno reage diretamente com um anticorpo especifico para o antígeno,ligado a uma enzima,formando um complexo insolúvel. Este teste é utilizado para detecção de antígenos podendo ser também um ensaio que pode ser utilizado para pesquisar antígenos brutos.É aplicado para resultar a titulação de anticorpos conjungado as enzimas marcadas utilizando antígenos purificados.
Etapas do ELISA direto :
1. Adsorção do antígeno a placa, em seguida a incubação, e a lavagem para eliminar os antígenos não ligado a placa e as ligações fracas.
2. Coloca-se a substancia bloqueante(proteína), em seguida a incubação. A substancia bloquenate vai ocupar os espaços não ocupado pelo antígeno, lavagem para eliminar ligaçoes fracas e as proteínas não ligadas a placa.

3. Coloca-se o anticorpo com a enzima (conjugado),em