HPLC (Resumo)

CROMATOGRAFIA A LÍQUIDO DE ALTO DESEMPENHO (HPLC)
É um tipo de cromatografia líquida que emprega pequenas colunas, recheadas de materiais especialmente preparados e uma fase móvel que é eluída sobre altas pressões. Ela tem a capacidade de realizar separações e análises quantitativas de uma grande quantidade de compostos presentes em vários tipos de amostras, em escala de tempo de poucos minutos, com alta resolução, eficiência e sensibilidade.

DESCRIÇÃO GERAL DE HPLC
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A amostra é dissolvida em um solvente e introduzida na coluna cromatográfica preenchida com a fase estacionária (FE)
Um solvente (FM) é bombeado com vazão constante e desloca os componentes da mistura através da coluna. Esses se distribuem entre as duas fases de acordo com suas afinidades
As substâncias com maior afinidade com a FE movem-se mais lentamente. Já as substâncias com pouca afinidade com a FE movem-se mais rapidamente.
Ao sair da coluna, os componentes passam por um detector que emite um sinal elétrico o qual é registrado, constituindo um cromatograma.

APARELHAGEM

O cromatógrafo tem os seguintes componentes principais:
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Reservatório de eluente (FM)
Bomba
Injetor
Pré-coluna
Coluna de 250 × 4 mm (Merck, Lichrosphere RP-18)
Detector de ultravioleta, λ = 225 nm
Registador/integrador (Aquisição de dados).

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AMOSTRA
A amostra é colocada no loop da válvula de injeção por meio de uma seringa
(ver figura 2), quando esta está em posição de carga (posição: load). Rodando o manípulo da válvula para a posição de injeção (posição: inject), dá-se uma alteração no trajeto do eluente no interior desta e a amostra é então arrastada para a coluna. O eluente, que é continuamente bombeado para a coluna, vai arrastar os componentes da amostra (designados vulgarmente por solutos) primeiro para o topo e depois ao longo da coluna.

Figura 2 - Representação esquemática da válvula de injecção e do