Estudante

FACULDADE DE CIÊNCIAS BIOMÉDICAS DE CACOAL- FACIMED

ALINE FERRARI, FERNANDA TRUBIAN, CAROLINE BEVILÁQUA

FERRAMENTAS DE GENÉTICA MOLECULAR

CACOAL, 2013
Ferramentas da Genética Molecular

Uso de vetores
Vetor é qualquer unidade autoreplicativa de DNA (fita dupla ou simples) que possa servir para carregar um inserto de DNA exógeno de um hospedeiro para outro (da mesma espécie ou de espécies distintas). Exemplos: plasmídeos (bacterianos ou eucriotos), bacteriófagos, vírus, cosmídeos, fagemídeos, BACs (cromossomos artificiais de bactérias) e YACs (cromossomos artificiais de leveduras).
Um exemplo de uso de vetores é nos plasmideos. Os plasmídeos são pequenas moléculas de DNA de cadeia dupla, que contêm os elementos necessários à sua replicação e um gene que confere resistência a um antibiótico. Podem estar presentes em duas ou mais cópias na célula e podem variar entre 5 e 400 kb (kilobases). Este plasmídeos, sendo capazes de amplificar o segmento de DNA neles inserido, são utilizados como vetores de clonagem.
Estes vetores constituem parte essencial no processo de clonagem, sendo necessária a atuação das enzimas de restrição para ligar o DNA a ser clonado ao DNA do vetor, através da produção de extremidades coesivas complementares (ou extremidades abruptas). Seguidamente, a molécula híbrida resultante é inserida numa célula hospedeira, muitas vezes bactérias, por um processo denominado transformação. O vetor pode assim sofrer replicações e proceder à conseqüente amplificação do número de cópias. Como foi referido anteriormente, estas células são identificadas devido a novas características concedidas pelo plasmídeo (por exemplo, sobreviver num meio contendo um dado antibiótico para o qual o plasmídeo confere resistência).

Biblioteca Genômica
Uma biblioteca genômica é uma coleção de fragmentos de DNA de uma determinada espécie de organismo, obtidos a partir da ação de endonucleases de restrição, ligados aos vetores apropriados e clonados após terem