Espectrofotometria

Introdução
A espectrofotometria é uma técnica analítica que avalia a capacidade dos solutos de absorver luz em comprimentos de onda específicos. A medida da luz absorvida permite inferir sobre a concentração do soluto em determinada solução. (MASTROENI, Marco; GERN, Regina. Bioquímica. Práticas adaptadas. Atheneu, 2008. Cap. 2.)
A curva-padrão corresponde à relação gráfica entre os valores de absorbância (A) e os de concentração. Com base na análise gráfica é possível verificar a linearidade da reação e calcular um fator de conversão de valores de absorbância em concentração.

Objetivo
Construção da curva padrão para ABF no comprimento de onda selecionado (580 nm).

Metodologia
Separar seis tubos de ensaio identificá-los conforme a tabela abaixo e adicionar as quantidades de água e solução de ABF designadas na tabela abaixo:

Tubos
Sol. De ABF (0,01 mg/ml)
Água destilada (ml)
B
0
5
I
1
4
II
2
3
III
3
2
IV
4
1
V
5
0

Ler a absorbância de cada tubo no comprimento de onda (λ) anteriormente selecionado. O tubo B constitui o branco.
Determinar o fator desta curva padrão: y = 148,61x

Resultados

Tabela 1. Valores de absorbância em função da concentração de ABF (mg/ml)
C (mg/ml)
Abs (580nm)
0

0,002
0,351
0,004
0,666
0,006
0,947
0,008
1,202
0,01
1,403

Gráfico 1. Absorbância em função da concentração de ABF (mg/ml)

Conclusão Através de processos físicos, realizados pelo aparelho de espectrofotometria podemos realizar a construção da curva padrão para ABF no comprimento de onda (λ).
Referência
http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/curvapadrao.html
http://www.rsc.org/education/teachers/learnnet/spectra/index2.htm