Enzimas

ENZIMAS - EXTRAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DA UREASE

A urease é uma enzima encontrada em bactérias e plantas e pode ser extraída com facilidade do feijão de porco (Canavalia ensiformes) e do feijão de soja ( Glycine max). Sua função é catalisar a decomposição da uréia em amônia e CO2.

Em meio aquoso: 2NH3 + 2H2O

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A atividade da enzima pode ser verificada pela formação de carbonato de amônio, que é um sal de reação básica e cuja presença pode ser revelada por meio de um indicador ácido-básico (vermelho fenol).

EXTRAÇÃO DA UREASE Pesar 15g de farinha de soja e colocar em um erlenmeyer de 250 mL. Adicionar 100mL de glicerol 75%. Fechar o mesmo. Agitar a suspensão por 15 min e colocar a 4 C até o dia seguinte. Após este período, filtrar o extrato glicerinado através de tecido, espremendo levemente. A solução de urease assim obtida é estável por longo tempo, se conservada na geladeira.

CARACTERIZAÇÃO DA ENZIMA

1. REAÇÃO DO BIURETO: Esta é uma reação muito utilizada para identificação de proteínas em uma dada solução.

TÈCNICA
Colocar 2 gotas da suspensão de urease em um tubo de ensaio, adicionar 2 ml de água destilada, agitar e adicionar 2ml do reativo de Biureto. Em outro tubo de ensaio , colocar 2ml de água destilada e 2ml do reativo do Biureto. Comparar a cor dos dois tubos e explicar o resultado obtido.

2- TESTE DA ATIVIDADE:
A atividade da urease pode ser demonstrada fazendo-a reagir com solução de uréia fracamente tamponada à pH 7, contendo o indicador vermelho de fenol, que muda de amarelo para rosa em meio básico.

TÉCNICA:
Pipetar em um tubo de ensaio 3ml de uréia tamponada, contendo o indicador vermelho de fenol. Adicionar 2 gotas da suspensão