Eletroforese

Universidade Federal de Pernambuco
Curso de Engenharia Biomédica

ELETROFORESE

Gabriela Nery França
Maria Eduarda Malta

Cidade Universitária
2011

Introdução

A eletroforese foi introduzida cientificamente em 1939 por A.Tiselius e A.E. Kabat com o objetivo de separar partículas orgânicas. A técnica é fundamentada na separação de material orgânico (proteínas, enzimas, DNA, RNA), inicialmente realizada em meio líquido, sendo posteriormente aperfeiçoada com o emprego de um meio-suporte (Acquaad, 1992). Na década de 1950, a técnica recebeu impulso e aperfeiçoamento, a partir dos experimentos de Smithies (1955) e de Hunter & Market
(1957), havendo forte aceitação nas décadas posteriores.
Consiste na migração de moléculas ionizadas de acordo com suas cargas elétricas e pesos moleculares em campo elétrico. Moléculas com carga negativa migram para o pólo positivo (anodo) e moléculas com carga positiva migram para o pólo negativo (cátodo). Em análises de proteínas é necessária a utilização de uma solução tampão visando manter o pH da solução constante, tendo em vista que dependendo do pH a carga das proteínas pode ser modificada.
O sistema-tampão usado consiste em duas partes: o tampão do gel usado na preparação do gel e o tampão do tanque, ou cuba eletrolítica, na qual se encontram os eletrodos (ânodo e cátodo). Para que a técnica funcione, deve ser desenvolvida sob voltagem(V), corrente (I), e potência (W) constantes, fornecidas por uma fonte apropriada de energia que tem por principio converter a corrente alternada em corrente continua.
Utiliza-se uma cuba com dois compartimentos separados por 5 a 10cm. Num compartimento o eletrodo com fio preto determina o pólo negativo, e no outro compartimento o eletrodo com fio vermelho é o pólo positivo. Nos dois compartimentos colocam-se a solução tampão com pH definido, e entre os compartimentos ajusta-se o suporte da eletroforese (agarose, acetato de celulose, gel de amido, gel de poliacrilamida). O