clonagem dna

CLONAGEM DE DNA
•CLONAGEM: é multiplicar assexuadamente.
Na Biologia Molecular, significa mais especificamente crescer uma colônia de bactérias a partir de uma célula única.
Clonagem de genes é essencialmente o processo de amplificar seletivamente um gene particular, incorporando-o numa bactéria e clonando a bactéria.
Primeiros experimentos bem sucedidos de clonagem foram mostrados no início da década de 1970.
Avanços conceituais e tecnológicos que contribuíram para a técnica de clonagem:
• Na década de 60: identificação de pequenas moléculas de DNA circular denominadas plasmídeos, que carregam genes de resistência bacteriana a antibióticos.
• No final da década de 60: descoberta e caracterização de endonucleases de restrição (Werner Arber, Hamilton Smith, Daniel Nathans; H. Smith e T. Kelly)• 1967: Gellert - purificação da enzima DNA ligase• 1972: Janet Mertz e Ronald Davis – usaram DNA ligase para juntar fragmentos digeridos com Eco RI.
• 1972: o grupo de Paul Berg conseguiu inserir genes do bacteriofago l e genes de E. coli no genoma do virus SV40, construindo moléculas recombinantes
A clonagem do DNA é importante para fazer estudos de expressão funcional, estudar a transcrição e a tradução do gene, sintetizar proteínas para produção de anticorpos e terapêuticos, entre outros usos.
OCORRÊNCIA DA CLONAGEM
Para clonar é necessário um vetor, o qual é uma molécula de DNA que é capaz de replicar independentemente do cromossomo da célula hospedeira. Além disso, o vetor aceita a inserção de DNA adicional em sua molécula de DNA, facilitando a clonagem.
Para que a clonagem ocorra, é preciso isolar um trecho de DNA que vai ser clonado. Esse processo envolve a fragmentação do DNA dos cromossomos na intérfase, o que é feito pela ação de enzimas especiais chamadas enzimas de restrição. As enzimas de restrição são identificadas pela sua capacidade de restringir o crescimento de certas viroses em algumas linhagens de E. Coli (gêneros diversos de bactéria bacilar