DNA clonagem

DNA

- O DNA encontra-se nos organismos vivos como moléculas de alto peso molecular.
E. Coli – 1 molécula de DNA circular, comprimento de 1,4 mm
Organismos superiores – comprimento de 1,7 m
- Conter a informação genética significa não somente armazenar e transmitir ao longo das gerações, mas expressar, ou seja, servir de molde para a síntese de RNAs e tradução destes em proteínas.
- DNA = ácido desoxirribonucléico
Compostos por:
- um açúcar = desoxirribose (2’ – desoxi- D-ribose)
- base nitrogenada ligada ao carbono 1’ da pentose
- 1 ou até 3 grupos fosfatos ligados ao carbono 5’ da pentose

DNA e a informação genética Experimento de transformação de Griffth com cepas de pneumococos liso e rugoso, 1928.

-Em células eucarióticas o processo de replicação do DNA ocorre durante um dos ciclos celulares denominado período de síntese (S), onde ocorre a iniciação das ORIGENS de replicação. O sinal que determina o início da fase S ocorre com a ativação da 1ª ORIGEM DE REPLICAÇÃO DO
CROMOSSOMO (oriC).
Fases da divisão celular: G1 – célula diplóide
S – célula tetraplóide
G2 – célula tetraplóide M – mitose (duas células diplóide)

De Robertis, E.M.F. Bases da Biologia
Molecular.4ªed,2006.

- Envolve dois processos:
* mudança da fase G1
S
*início da replicação nas diferentes origens de replicação (oriC)
-ORIGEM

Ponto inicial da replicação do DNA
Regiões ricas em AT
O DNA de procarioto, plasmídeos e vírus possuem somente uma origem de replicação
Em eucariotos são encontradas várias origens de replicação
São sítios específicos de reconhecimento da proteína iniciadora DnaA monômero capaz de se ligar a oriC
Funções: -ligar-se à origem, determinando o lugar do início da replicação; - induzir a abertura das fitas de DNA.

Tuner, P.C., et al. Biologia Molecular, 2ª ed,2004

MECANISMO DE REPLICAÇÃO
• Processo semi-conservativo = as duas fitas de DNA parental são copiadas, originando moléculas filhas com somente uma das