cinética enzimática

UFF – Universidade Federal Fluminense
Instituto de Biologia
GCM – Departamento de Biologia Celular e Molecular
Professora:
Aluna:

CINÉTICA ENZIMÁTICA

1 - Objetivo: Avaliar o efeito de alguns fatores que interferem na atividade enzimática, tais como, tempo de reação, a concentração do substrato e a concentração da enzima.

2 - Reagentes:
- Uma batata inglesa média
- Substrato: para-nitrofenilfosfato de sódio
- NaoH

3 - Procedimento Experimental:
- Enumerar os tubos de ensaio
- Colocar os reagentes na mesma ordem em todos os tubos
- O homogeneizado deve ser sempre adicionado por ultimo

3.1 – Influencia do tempo na reação
TUBO
SUBSTRATO
ÁGUA
HOMOGENEIZADO
Tempo após a adição de 2ml de NaOH
1
3,0
2,0
0,5*
0
2
3,0
2,0
0,5
2
3
3,0
2,0
0,5
5
4
3,0
2,0
0,5
10
5
3,0
2,0
0,5
20
6
3,0
2,0
0,5
30
*Adicionamos 2ml de NaOH antes de adicionar o homogeneizado

3.2 – Influencia da Concentração da Enzima
TEMPO
SUBSTRATO
ÁGUA
HOMOGENEIZADO
7
3,0
1,0
0,0
8
3,0
0,9
0,1
9
3,0
0,5
0,5
10
3,0
0,0
1,0
- Após 5 minutos de reação, adicionou-se 2ml de NaOH em cada tubo.

3.3 – Influencia da Concentração do Substrato
TEMPO
SUBSTRATO (µM)
SUBSTRATO (mL)
ÁGUA
HOMOGENEIZADO
11
0,0
0,0
5,0
0,5
12
54,5
0,3
4,7
0,5
13
163,0
0,9
4,1
0,5
14
272,0
1,5
3,5
0,5
15
545,0
3,0
2,0
0,5
- Após 10 minutos de reação, adicionou-se 2mL de NaOH em cada tubo.

4 – Resultados e Discussão Nos tubos de 1 a 6 houve variação na coloração, devido a diferença de tempo para adição do NaOH. Quanto maior foi o tempo esperado, mais concentrada (coloração mais forte) a solução se tornou. Ao adicionarmos o NaOH, foi possível visualizar uma diferença muito grande entre o tubo 1, que teve a adição de NaOH inicialmente, para o tubo 6, no qual adicionou-se NaOH após 30 minutos. Sendo o primeiro com uma cor translúcida e o ultimo com cor amarelo forte. Nos tubos de 7 a 10, a variação ocorreu