Caracterização cinética da enzima invertase

TP2 –CARACTERIZAÇÃO CINÉTICA DA ENZIMA INVERTASE

Isabel de Almeida e Silva nº75563 Maria Teresa Cunha nº75675 Duarte Mata nº76940

Resumo
Este trabalho laboratorial teve como objectivo estudar a cinética da enzima invertase (beta-fructofuranosidase) na reacção de hidrólise da sacarosee a determinação dos parâmetros cinéticos Km e Vmáx. Para a obtenção dos valores das velocidades iniciais determinaram-se as diferentes concentrações de oses redutores produzidas durante um intervalo de 7 minutos. Os parâmetros cinéticos, Vmáx e Km, foram obtidos a partir da construção de um gráfico do inverso das velocidades iniciais em função do inverso da concentração de sacarose. O valor do km obtido (45 mM) tem um desvio médio do da literatura de 24,5%.

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Cálculo e discussão
Recorrendo à recta padrão do DNS (y = 0,5266x – 0,0163; R2 = 0,9931) previamente calculada , obteve-se a concentração de glucose (mg/L) associada a cada absorvência. A partir da respectiva massa molar (108,16g/mol) converteu-se esta concentração em 10 / , obtendo-se para cada concentração de substrato o gráfico que relaciona a concentração de glucose com o tempo.

15 g/L
Tempo (min) 1 2 3 4 5 6 7 Abs (A) 0,01 0,023 0,037 0,073 0,082 0,101 0,122 [Glu] (mg/L) 49,943 74,63 101,215 169,658 186,669 222,73 262,628 [Glu] (10E4mol/L) 2,77214698 4,142428952 5,618061723 9,417073712 10,36128996 12,36289964 14,57748668

15 g/L
20 15 10 5 0 0 2 4 6 8 y = 2,0214x + 0,3787 R² = 0,9841 [Glu] (10E4mol/L) Linear ([Glu] (10E-4mol/L))

30 g/L
Tempo (min) 1 2 3 4 5 6 7 Abs (A) 0,025 0,052 0,086 0,116 0,158 0,181 0,219 [Glu] (mg/L) 78,428 129,67 194,265 251,234 330,991 374,668 446,829 [Glu] (10E4mol/L) 4,353241563 7,197491119 10,78291519 13,94504885 18,37205817 20,7964032 24,8017873

30 g/L
30 20 10 0 0 2 4 6 8 y = 3,4333x + 0,588 R² = 0,9973 [Glu] (10E4mol/L) Linear ([Glu] (10E-4mol/L))

45 g/L
Tempo (min) 1 2 3 4 5 6 7 Abs (A) 0,019 0,045 0,075 0,112 0,145 0,044 0,195 [Glu] (mg/L) 67,034 116,407