Biomassa

DETERMINAÇÃO DA BIOMASSA

A.1 Dosagem de proteínas – Método de Lowry

A quantificação da biomassa existente nos biorreatores e na coluna foi realizada através da análise de proteínas, utilizando o Método de Lowry, conforme metodologia abaixo, descrita por Bergamasco (1996).

Reativos * Reativo A: 2 g de Na2CO3 seco + 0,02 g de tartarato duplo de sódio e potássio em 100 mL de NaOH 0,1 N. * Reativo B: 0,5 g de CuSO4 + 2 gotas de H2SO4 concentrado em 100 mL de água destilada. * Solução AB: 50 mL do reativo A + 1 mL do reativo B. Preparar imediatamente antes da dosagem. * Reativo de Folin: Solução 1 N, conservar ao abrigo da luz. * Solução Padrão de Soro Albumina Bovina (BSA) 100 mg/L: 10 mg BSA em 100 mL de água destilada, adicionar cuidadosamente água no balão volumétrico para evitar a formação de bolhas. Conservar sob refrigeração (não agitar).

Procedimento experimental

Em Suspensão * Extração de Proteínas com NaOH 1 N a 80°C.
5 mL de solução padrão de BSA ou de amostra, 5 mL de NaOH 1 N. Agitar por 5 minutos com ultrassom e recobrir com papel alumínio, deixar em banho maria a 80°C por 30 minutos. Agitar com ultrassom. * Curva Padrão
Preparar uma série de amostras de 10 a 100 mL/L de BSA. A partir da solução a 100 mg de BSA/L, conforme indicado na Tabela A.1.

Tabela A.1 – Diluições da Albumina Bovina (BSA) para preparação da curva de calibração BSA mg/L | V BSA mL | V NaOH mL | 0 | 0,0 | 1,0 | 10 | 0,1 | 0,9 | 30 | 0,3 | 0,7 | 50 | 0,5 | 0,5 | 80 | 0,8 | 0,2 | 100 | 1,0 | 0,0 |

* Dosagem * 1 mL de solução de proteína a dosar. * 3 mL de solução AB. Cobrir com parafilm. * Agitar por 5 minutos no Ultrassom e esperar por 10 minutos precisos ao abrigo da luz. * Adicionar 0,3 mL de reativo de Folin 1 N. Cobrir com parafilm. * Agitar por 5 minutos no Ultrassom, deixar em repouso por 30 minutos ao abrigo da luz. * Efetuar a medida após os 30 minutos num