biologia eletroforese

ELETROFORESE

A eletroforese em gel de agarose consiste no método padrão usado para separar, identificar, analisar, caracterizar e purificar fragmentos de DNA. A eletroforese em gel de acrilamida é usada em menor escala. A técnica é simples, rápida e capaz de separar misturas de fragmentos de DNA que não podem ser separados por outros métodos, tais como centrifugação com densidade de gradiente ou por velocidade de sedimentação. A localização do DNA no gel pode ser determinada diretamente. As bandas no gel são coloridas principalmente por Brometo de Etídeo em baixa concentração, que colore por intercalar-se na dupla fita de DNA. Concentrações de até 1 ng de DNA podem ser visualizadas por exame direto de gel na luz ultravioleta.

Uma molécula de DNA, quando exposta a um campo elétrico, migra para o eletrodo na velocidade ou mobilidade eletroforética, proporcional a força do campo e a carga líquida da molécula. A mobilidade eletroforética é também inversamente proporcional ao coeficiente friccional da molécula, que, por sua vez, é função do tamanho e forma da molécula, e da viscosidade do meio. Portanto, uma mistura de moléculas diferentes pode ser separada eletroforeticamente com base em:

a. tamanho da molécula;
b. forma ou conformação da molécula;
c. magnitude das cargas elétricas líquida na molécula;

Quando aplicadas na mesma posição num campo elétrico, as moléculas serão separadas em bandas e migrarão a velocidades diferentes para posições diferentes no meio. Sob condições fisiológicas, os grupos fosfatos dos ácidos nucléicos encontram-se ionizados. Cadeias de polinucleotídeos de DNA e RNA são chamados de poli-ânions e migram para o eletrodo POSITIVO (anodo) quando colocados em campo elétrico. Devido à natureza repetitiva dos fosfatos, o DNA dupla fita possuem aproximadamente a mesma relação de massa e carga líquida. Ajustando a viscosidade do meio, entretanto, os efeitos da fricção e o formato das moléculas podem ser usados, permitindo