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UNIVERSIDADE TUIUTI DO PARANÁ
FICHA DE AULAS PRÁTICAS
LABORATÓRIOS - FCBS

Título da Prática: Dosagem de colesterol total
Professores: Daniela Florencio Maluf

1.OBJETIVO DA PRÁTICA:
Objetivo geral:
Realizar a dosagem de colesterol total utilizando-se sangue como material biológico, seguindo as instruções do Kit de determinação do colesterol por metodologia enzimática-colorimétrica
Objetivos específicos:
Revisar as principais funções do colesterol no organismo; correlacionar valores de quantificação do colesterol com possíveis anormalidades metabólicas

2. PRÁTICA
A determinação do colesterol deve ser feita em soro ou plasma, sendo que anticoagulantes como heparina, oxalato, fluoreto ou EDTA não interferem. As amostras lipêmicas devem ser bem misturadas antes de se iniciar a dosagem. Não utilizar amostras fortemente hemolisadas. A amostra de sangue deve ser colhida após um jejum de 12 horas para evitar a interferência da lipemia pós-prandial, que geralmente está presente em amostras obtidas sem jejum.

3. MATERIAL
1 centrífuga (2.000rpm por 10 minutos)
5 tubos de ensaio pequenos para cada amostra de sangue
1 espectrofotômetro ajustado para 500nm
1 banho-maria a 37ºC
1 pipeta automática de 1000μL
1 pipeta automática de 10μL
1 cronômetro

4.TÉCNICA - vide bula do kit de dosagem
1. Deixar reagentes atingirem a temperatura ambiente antes da realização do teste
2. Centrifugar a amostra de sangue a 2000 rpm por 10 min. Utilizar somente o soro para realização dos ensaios.
2. Identificar tubos de ensaio com: Branco, Padrão e Teste. Sendo que as amostras teste devem ser realizadas em triplicata, para cada paciente.

Tubos
Branco
Padrão
Teste
Amostra
-
-
10 μL
Padrão(1)
-
10 μL
-
Reagente de cor (2)
1000 μL
1000 μL
1000 μL
3. Homogeneizar bem e incubar os tubos durante 5 min em banho-maria a 37ºC
4. Ler absorbância do Padrão (Ap) e do Teste (At) zerando o aparelho com o Branco em 500nm
5. A cor é estável durante 2 horas