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a) Lavar os materiais com sabão neutro. b) Ferver por 10 minutos – 60 a 70ºC. c) Retirar e lavar com água gelada (Pisseta). d) Borrifar com álcool 70º. e) Secar com papel toalha. f) 2) GRAM + : ficam azuis, pois não permitem a entrada do agente diferenciador. g) 3) GRAM - : ficam vermelhas, pois permite entrada do agente diferenciador. h) Nota - Parede celular : camadas múltiplas externamente à membrana plasmática . Tem camada interna que é composta por peptideoglicana envolta por uma camada externa (varia espessura e composição química). Peptideoglicana - resistência a meios de baixa pressão osmótica como a água ; suporte estrutural e mantém forma característica da bactéria ; é um açúcar com grupos amina sendo uma esrtutura estável. i) 4) Diferenças entre as paredes da bactéria GRAM + e GRAM - : j) GRAM + : camada de peptideoglicana é mais espessa e algumas também possuem uma camada de ácido teicóico externa à camada de peptideoglicana. k) Nota - ácido teicóico : estrutura anti-gênica importante, reconhecida pelo sistema imune (induz formação de anticorpos espécie - específicos). Encontrado na camada externa da parede celular de GRAM +. Alguns polímeros de ácido teicóico penetram através da camada de peptid3oglicana, ligando-se covalentemente aos lipídeos da membrana citoplasmática, sendo agora denominada de ácido lipoteicóico, outros se ligam ao ácido murâmico da peptideoglicana. l) GRAM - : camada externa composta por lipopolissacarídeos, lipopoliproteínas e fosfolipídeos. Há o espaço periplasmático - entre membrana citoplasmática e camada de peptideoglicana que em alguma sespécies contém B - lactamases (degrada penicilina ) e B - lactâmicas. m) GRAM - tem parede mais fina, porém mais complexa. n) Nas GRAM - possui endotoxinas (lipopolissacarídeos). o) GRAM -