TRABALHO EXTRA O DNA SANGUE

1. INTRODUÇÃO

Sendo caracterizada por corar fortemente ao aplicar corantes na célula, a cromatina é constituída de desoxirribonucleoproteína, ou seja, DNA enrolado por proteínas histonas (básicas) e proteínas não-histonas (ácidas).

Essas proteínas são responsáveis por alterações na cromatina como, por exemplo, a grande participação na compactação da cromatina em, respectivamente, nucleossomo, cromatossomo, solenoide, cromátides e cromossomo.

As modificações estruturais da cromatina ocorrem para expor certas regiões do DNA, devido à necessidade de proteínas específicas do processo de tradução do RNA, do reparo genético e da replicação do DNA em acessar os códigos genéticos.

As alterações resultam na visualização microscópica de regiões da cromatina mais coradas que outras na interfase. Isso acontece porque as regiões mais escuras, denominadas heterocromatinas, são porções mais enroladas ou condensadas da cromatina interfásica; enquanto que as regiões mais claras, denominadas eucromatinas, são porções menos condensadas e onde há genes ativos que, portanto, podem ser expressos.

Fonte: Paula Araújo
2. OBJETIVO

Extrair o DNA de leucócitos do sangue.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

Extração de DNA na amostra de sangue e reagentes

100mL de Água Destilada Gelada (Pissete)

Álcool Absoluto Gelado

Banho Maria a 55 oC
1 Caixa de ponteiras Amarelas

1 Centrifuga

Descarte com água e Hipoclorito

5 Estantes de tubo de ensaios

1 Par de luvas

20 Pipetas pasteurs

5 Pipetas de 100 microlitros

SDS 20% (10 gramas de dodecil sulfato de sódio em 50 mL de Água)

Solução de NaCl 6M

100mL de Solução de Lise de Leucócitos ( 10mM Tris-HCL pH 8,0; 100 mM NaCl; 10mMEDTA pH8,8 e 1% SDS)

5 Tubos Falcos de 50 mL

10 Tubos Falcos de 15 mL (ou menos) com tampa.

5 Tubos de sangue com EDTA

Metodologia utilizada na extração de DNA

a) Obtenção da camada leucocitária
Centrifugou-se por 7 minutos a 2000 RPM o sangue e obteu-se o Buff Coat.