Teste de diabete

DOSAGEM ENZIMÁTICA DA GLICOSE SANGÜÍNEA PELO MÉTODO DA
GLICOSE OXIDASE

1- OBJETIVOS:

Compreender o funcionamento de um determinação de glicose em amostras de sangue;
Compreender os cálculos concentração do analito (glicose).

utilizados

espectrofotômetro

para

a

determinação

para

da

2- MATERIAIS E MÉTODOS
Tubos de ensaio
Micropipetas de 10 e 1000 l
Amostras de sangue colhido com fluoreto
Banho-maria
Fotômetro
Cronômetro
Estante para tubos
Água
Papel absorvente
PRINCÍPIO DO MÉTODO
A glicose da amostra na presença de glicose oxidase (GOD) se transforma em água oxigenada + ácido glucônico.
Glicose + O2 + H2O
Ácido Glucônico + H2O2
GOD
2H2O2 + fenol + 4-aminoantipirina

antipirilquinonimina + 4H2O

POD
Composto róseoavermelhado

500nm

PRODUTO UTILIZADO:
Glicose PAP liquiform
Labtest Diagnóstica
Reativos:
Reagentes 1: Contém tampão 50 mmol/L; pH 7,5; glicose oxidase ≥ 77U/L; 4aminoantipirina ≥ 290 mol/L; fenol ≥ 1 mmol/L e azida sódica 7,5 mmol/L.
Padrão (100 mg/dL): Contém glicose 100 mg/dL e biocida não tóxico.
3- PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL:
1. Tomar 3 tubos d ensaio e proceder como a seguir:

2. Misturar vigorosamente e colocar em banho-maria a 37C durante 15 minutos. O nível da água deve ser superior ao nível dos reagentes nos tubos de ensaio.
3. No espectrofotômetro, determinar as absorbâncias do teste e padrão em 505 nm, acertando o zero com o branco. A cor é estável por 60 minutos.
4. Determinar as concentrações das amostras.

4- Procedimentos gerais de ajuste do espectrofotômetro:
Ligar o aparelho;
Modo básico (tecla 1);
Escolher a absorbância (tecla 1);
Selecionar o comprimento de onda desejado;
Confirmar com OK;
Introduzir a cubeta com o branco (água destilada) no porta-cubeta;
Teclar ENTER. Observar se zerou;
Colocar a cubeta com o padrão
Teclar ENTER para a leitura do padrão (anotar a absorbância);
Colocar a cubeta com a amostra (anotar a absorbância);

Teclar ENTER para a