saude humana

HIBRIDAÇÃO IN SITU
CROMOSSÔMICA
PRINCÍPIOS E APLICAÇÕES

Hibridação in situ in situ: em seu local natural ou original método para identificação e localização de ácidos nucléicos em materiais fixados

CROMOSSOMOS

NÚCLEOS INTERFÁSICOS

CÉLULAS

satélite bovino cromossomos metafásicos de Brycon lundii (matrinchã)

cromossomos 13 (verde) e 21 (vermelho) humano

FIBRAS DE CROMATINA EXTENDIDAS (ECF)

fibroblastos

TECIDOS

embrião de peixe

1

PAREAMENTO DE BASES COMPLEMENTARES
DE DUAS FITAS SIMPLES DE ÁCIDO NUCLÉICO

PRODUTO FITA DUPLA

TACTCGACAGGCTAG
CTGATGGTCATGAGCTGTCCGATCGATCAT

ALVO

molécula a ser identificada ou estudada - seqüência de RNA ou DNA

SONDA

se liga à seqüência alvo específica - seqüência de DNA (DNA total, seqüências

específicas de DNA)

MARCADOR

molécula detectável que se liga à sonda (material radioativo, produto

enzimático ou composto fluorescente)

- marcadores radioativos: H3, P32, P33, S35
- marcadores enzimáticos: fosfatase alcalina, peroxidase
- marcadores fluorescentes: FITC (Fluoresceína Isotilcianato)
AMCA (Amino Metil Cumarina Ácido Acético)
Texas Red

2

HIBRIDAÇÃO IN SITU EM CROMOSSOMOS

Gall JG, Pardue ML (1969) Formation and detection of
RNA-DNA hybrid molecules in cytological preparations.
Proceedings of the Natural Academy of Science USA 63:
378-383.
genes 18+28S em Xenopus laevis

Mary-Lou Pardue
Massachusetts Institute of Technology
Department of Biology

Pardue ML, Gall JG (1970) Chromosomal localization of mouse satellite DNA and nuclear location of mouse satellite DNA in individuals cells. Science 168: 1356-.
DNA satélite em camundongo

Joseph G. Gall
Carnegie Institution of Washington
Department of Embriology

3

Preparation and

4

PREPARAÇÃO DA SONDA

SONDAS

5

PREPARAÇÃO DA SONDA

- OBTENÇÃO/CONSTRUÇÃO (digestão enzimática, PCR, síntese de oligos, screening de bibliotecas, microdissecção cromossômica, chromosome