Relatório química

CURSO: Licenciatura em Química
DISCIPLINA: Bioquímica I – 1º. Semestre
DISCIPLINA: Profa. Dra. Maria de Lourdes Corradi C. da Silva

2a Aula prática

FOTOCOLORIMETRIA E ESPECTROFOTOMETRIA

Objetivos:

• Elaborar curvas de calibração e estabelecer a sensibilidade de um método fotocolorimétrico.

• Relacionar os métodos fotocolorimétricos às situações onde poderão ser aplicados, tendo como exemplo a dosagem de proteínas do leite pelo método da reação do biureto.

• Resolver problemas específicos: cálculos das diluições e de concentrações.

A fotocolorimetria e a espectrofotometria são técnicas analíticas que permitem determinar a concentração das soluções através da medida da intensidade de luz absorvida ou transmitida pelas mesmas. Na fotocolorimetria as soluções são examinadas sob espessura constante e utilizando filtros de luz, para isolar uma região limitada do espectro. A técnica é utilizada tanto para determinar a concentração de substâncias coloridas como daquelas incolores, mas capazes de formar compostos coloridos por meio de reações adequadas. Na espectrofotometria, as soluções são examinadas sob espessura constante utilizando uma radiação de comprimento de onda definido, obtido por intermédio de um prisma ou rede de difração. Os métodos fotométricos encontram grande aplicação em bioquímica sendo usados preferencialmente em relação a outros métodos, sempre que apresentarem o grau de exatidão desejado, uma vez que permitem medidas rápidas e sensíveis. A sensibilidade é particularmente importante na determinação de pequenas quantidades de metabólitos e outras substâncias presentes nos materiais biológicos. As relações quantitativas nessas técnicas, são dadas pelas leis de Lambert-Beer, que se expressam pela seguinte equação:

T = It = 10- ªcI sendo: T = transmissão ou transmitância; Io Io = intensidade do feixe luminoso incidente; It = intensidade de feixe luminoso transmitido