Química

Introdução a métodos bioquímicos

ELETROFORESE

1- INTRODUÇÃO Todas as moléculas de proteínas são formadas por uma cadeia de aminoácidos, unidos entre si por ligações pepitídicas. Os aminoácidos, por sua vez, possuem uma estrutura em comum, contendo um grupo amino e um grupo carboxil e o chamado grupamento lateral. Este último é a estrutura que fornece identidade ao aminoácido. A combinação de diferentes aminoácidos, bem como a quantidade de aminoácidos presentes em uma molécula de proteína, confere a ela peso e carga elétrica distinta. Uma das técnicas de separação de proteínas é conhecida como eletroforese. Esta técnica é bastante ampla, e se refere à migração de solutos e partículas em um meio líquido, sob influência de um campo magnético. Quando uma solução é submetida a um campo elétrico, os cátions migram para o cátodo (pólo negativo) e os ânions, para o ânodo (pólo positivo). A técnica de eletroforese permite a separação analítica ou preparação dos componentes de uma mistura de várias espécies iônicas com cargas diferentes. Além da separação qualitativa de partículas carregadas, a eletroforese permite separar partículas com a mesma carga, porém com quantidades de cargas diferentes. Tomando como exemplo as proteínas, que são polieletrólitos com cargas dependentes do pH do meio circundante, pode-se utilizar a técnica de eletroforese a fim de separar uma mistura dessas moléculas. Existem atualmente dois tipos de metodologia de eletroforese: Eletroforese convencional por zona e Eletroforese capilar. Na eletroforese convencional por zona as proteínas migram em meio de suporte poroso como acetato de celulose, gel de agarose ou poliacrinamida, gerando um eletroferograma por zonas de proteínas. Já a eletroforese capilar baseia na separação das proteínas pelo seu tamanho e outras propriedades físico-químicas, através do fluxo em um tubo capilar. O método é semelhante à HPLC (Cromatografia Líquida de Alta Performance) , que utiliza colunas similares