Purificação do Dna

CURSO: BIOMEDICINA

DISCIPLINA: BIOLOGIA MOLECULAR

PROFESSOR: TARCÍSIO

PURIFICAÇÃO DE DNA

DIEGO MORAES
RAFAELLA PAES

BELÉM (PA)
MARÇO/2013
1- INTRODUÇÃO

Atualmente, são utilizadas várias técnicas para a extração do DNA. No entanto, o mais utilizado é o sangue, que fornece uma fonte abundante de material genético, facilitando a análise posteriormente. Nesta prática, se torna possível a extração do mesmo para sua purificação e análise visual.

2 - OBJETIVOS

Extrair o DNA do sangue a partir do isolamento das células sanguíneas.

3 - MATERIAIS E MÉTODOS
3.1 Material
Becker médio;
Tubos tipo Falcon (15 ml);
Micropipetas;
Centrífuga;
Banho-maria;
Ponteiras;
Solução lise de hemácias;
Solução lise de leucócitos;
Solução de Acetato de amônio;
Álcool isopropílico.

3.2 Métodos
1. Adicionar sangue total (2.0 ml) em um tubo e acrescentar 10 ml tampão de lise de hemácias (5 mmol/L de MgCl2, 20 mmol/L de Tris-HCI, PH 7,8);
2. Centrifugar 3.000 rpm/ 5’;
3. Desprezar o sobrenadante e repetir o processo 1x;
4. Adicionar ao pellet 5.0 ml de tampão de lise de leucócitos (0.2 mol/L de NaCl, 1mmol/L de EDTA e 10 mmol/L de Tris-HCI, PH 7,8);
5. Deixar em banho-maria 55ºC por 20 minutos;
6. Acrescentar 2,0 ml de solução de Acetato de amônio (precipitação de proteínas); Deixar em banho-maria 55ºC por 20 minutos;
7. Centrífuga 3.000 rpm / 5’;
8. Retirar o sobrenadante e transferir para outro tubo de 15 ml;
9. Acrescentar isopropanol (até completar o tubo);
10. Agitar por inversão até o aparecimento de nuvem do DNA;
11. Centrifugar 3.000 rpm/10’;
12. Deixar o DNA secar a temperatura ambiente e em seguida adicionar água;
13. Deixar o DNA hidratar em temperatura ambiente por 6h e guardar o material congelado.

4 - RESULTADOS

Quando é adicionada a lise de hemácias, as células irão inchar e