Método de Coloração de Gram

UNIVERSIDADE DE RIBEIRÃO PRETO
BACHARELADO EM FISIOTERAPIA

MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM

SOLANGE DOS SANTOS BERTOLDO

Guarujá – São Paulo – Brasil
Setembro 2014

SUMÁRIO

Objetivo 2
HISTÓRIA 3
PASSO A PASSO 3
RESULTADOS 4

Objetivo

Realizar a técnica de Coloração de Gram;
Aprender o fundamento do método de coloração de Gram;
Comparar a estrutura da parede celular das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas;
Permitir a observação da estrutura bacteriana e fornecer informações a respeito do comportamento do seu material celular diante dos corantes de Gram.

MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM
HISTÓRIA
A coloração Gram recebeu este nome em homenagem a seu descobridor, o médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram.

Em 1884, Gram observou que as bactérias adquiriram cores diferentes, quando tratadas com diferentes corantes. Isso permitiu classificá-las em dois grupos distintos: as que ficavam roxas/azuis, que foram chamadas de Gram-positivas, e as que ficavam vermelhas/rosas, chamadas de Gram-negativas.
PASSO A PASSO
1. Cubra o esfregaço com violeta-de-metila e deixe por aproximadamente 15 segundos;
2. Adicione igual quantidade de água sobre a lâmina coberta com violeta-de-metila e deixe agir por mais 45 segundos;
3. Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; Cubra a lâmina com lugol diluído (1/20) e deixe agir por aproximadamente 1 minuto;
4. Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente;
5. Adicione álcool etílico (99,5º GL) sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais corante;
6. Lave em um filete de água corrente;
7. Cubra a lâmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos; 8. Lave em um filete de água corrente.
9. Deixe secar ao ar livre, ou seque suavemente, com o auxílio de um papel de filtro limpo;
10. Coloque uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço;
11. Leia em objetiva de imersão (100 X).
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