Microbiologia

1. Introdução

O método de contagem padrão em placa é a técnica mais utilizada na determinação do tamanho de uma população bacteriana numa placa de Agar, que é um meio nutritivo solidificado com Agar, um polissacarídeo complexo extraído de determinadas algas marinhas. A grande vantagem desse método é que as células viáveis são quantificadas. A desvantagem pode ser considerada o tempo, em geral 24 horas, para o aparecimento das colônias visíveis em placa, podendo acarretar problemas na aplicação dessa metodologia em algumas áreas, como, por exemplo, no controle de qualidade de leite, quando não é possível manter o lote Durante um período longo.
O método de contagem em placa considera que cada colônia é originada do crescimento e da multiplicação de uma bactéria. Isso nem sempre é verdade uma vez que as bactérias frequentemente crescem em cadeias ou como grumos. Portanto, uma colônia é resultado não de uma única bactéria, mas de uma cadeia ou um grumo de bactérias. Para refletir essa realidade, as contagens em placas são frequentemente chamadas de unidades formadoras de colônias (UFC).
Deve-se realizar a contagem somente em placas que contenham de 25 a 250 colônias. Para isso realiza-se o método de diluição seriada para garantir que o numero de colônias na placa permaneça na faixa desejada. Segundo Black começa-se com organismos em meio líquido. Acrescenta-se 1 mL a 9 mL de água estéril, cria-se uma diluição de 1:10; acrescentando-se 1 mL da diluição de 1:10 a 9 mL de água estéril, cria-se uma diluição de 1:100; e assim por diante. O número de bactérias por mililitro de fluido é reduzido em 9/10 a cada diluição.
Existem dois métodos para realizar a contagem de bactérias em placas: o método de espalhamento em placa e o método pour plate. Utilizou-se no experimento o método pour plate onde o inoculo pode ser realizado com um volume de 1,0 mL ou 0,1 mL da diluição bacteriana diretamente na placa de petri e o meio é vertido sobre a amostra, e misturada com agitação