ISOLAMENTO DE GENE

Isolamento e Manipulação de Gene

Amostras de moléculas de DNA contendo o gene de interesse são chamadas de DNA doador. Os fragmentos de DNA doador são inseridos nos cromossomos "acess6rios" não essenciais. Esses cromossomos acess6rios "levarão" e amplificarão o gene de interesse, sendo assim chamados de vetores. Cada fragmento é fundido com um cromossomo vetor para formar moléculas de DNA recombinante.
Como o cromossomo acessório normalmente e amplificado por replicação, a molécula recombinante e similarmente amplificada durante o crescimento e divisão da célula bacteriana na qual o cromossomo reside. Esse processo resulta em um clone de células idênticas, cada uma contendo a molécula de DNA recombinante, e, assim, essa técnica de amplificação e chamada de clonagem de DNA.
DNA genômico. Esse DNA e obtido diretamente dos cromossomos do organismo em estudo. É a fonte mais direta de DNA. O DNA cromossômico precisa ser cortado antes que a clonagem seja possível. cDNA. DNA complementar (cDNA) e uma versão bifilamentar do DNA de uma molécula de RNAm. Nos eucariontes superiores, um RNAm e um previsor mais útil de uma sequencia polipeptídica do que e a sequencia genômica, pois os íntrons foram removidos. Os pesquisadores preferem usar um cDNA do que o próprio RNAm, pois os RNA são inerentemente menos estáveis do que o DNA e não existem técnicas para, rotineiramente, amplificar e purificar moléculas individuais de RNA. O cDNA é feito de RNAm com o uso de uma enzima especial chamada transcriptase reversa, originalmente isolada de retrovírus. Usando uma molécula de RNAm como molde, a transcriptase reversa sintetiza uma molécula de DNA unifilamentar que pode ser usada co1no molde para a síntese de DNA bifilamentar. O cDNA não precisa ser cortado para ser clonado.
DNA sintetizado quimicamente. Às vezes, um pesquisador precisa incluir em uma molécula de DNA recombinante uma sequencia especifica que, por algum motivo, não pode ser isolada do DNA ou eDNA genômico natural