imunocitoquimica e imunohistoquimica

Imunocitoquímica e Imunohistoquimica

A denominação imunohistoquimica é habitualmente utilizada para avaliação de fragmento tissulares. Imunocitoquimica por sua vez se refere a avaliação a nível celular
Essa tecnica usa anticorpos com fluorescência e antianticorpos para obter uma localização intra e extracelular mais precisa de macromoléculas do que é possível com a histoquímica. Este procedimento requer a obtenção de um anticorpo contra uma macromolécula determinada, que se deseja localizar, e marcar o anticorpo com um corante fluorescente como a fluoresceína ou a rodamina.
Para seu reconhecimento, os anticorpos devem estar marcados com algum composto que depois possa ser visualizado seletivamente. As formas básicas de marcação utilizadas em microscopia óptica são:
- Enzimas. Ex: Peroxidase - Compostos fluorescentes. Ex: isotiocianato de fluoresceína - Substância dispersora de elétrons. Ex: ouro (não tão utilizada)

Há dois métodos para realizar a marcação com anticorpos: o direto e o indireto.
- O método direto o anticorpo contra a macromolécula é marcado com um corante fluorescente, a seguir esse anticorpo reage com a macromolécula, e o complexo resultante pode ser observado em um microscópio de fluorescência.
- O método indireto o anticorpo com marcação fluorescente é preparado contra o anticorpo primário especifico para a macromolécula de interesse. Tendo o anticorpo primário reagido com o antígeno o anticorpo marcado é então acrescentado e reage com o complexo antígeno-anticorpo original, formando um complexo secundário visível pela microscopia de fluorescência.
O método indireto é mais sensível que o método direto porque numerosos antianticorpos marcados ligam-se ao anticorpo primário tornando mais fácil