Genéticca

Introdução A Engenharia genética constitui um conjunto de técnicas de análises moleculares que permitem estudos de caracterização, expressão e modificações do material genético (DNA ou RNA) dos seres vivos.
Entre as técnicas utilizadas, a transformação bacteriana é utilizada para inserir moléculas de DNA dentro da célula bacteriana. Esse método foi descrito inicialmente em 1928 por Griffith, onde posteriormente essa técnica resultou no descobrimento do material genético.
Nem todas as células bacterianas são transformáveis, apenas algumas linhagens ou espécies são de fato. Uma célula capaz de incorporar uma molécula de DNA e ser transformada é denominada como competente. Para maior eficiência na incorporação, é aplicado algumas técnicas utilizando soluções simples, como glicerol 10% e CaCl2.
A técnica utilizando o choque térmico complementa este processo de captação, provavelmente criando um desbalanço térmico entre o interior e o exterior da célula bacteriana, o que dilata os poros da zona de adesão, auxiliando no bombeamento do DNA através desses canais.
A eletroporação designa o uso de pulsos curtos de alta voltagem, que ultrapassam a barreira da membrana celular, promovendo um rearranjo estrutural desta membrana e, tornando-a altamente permeável a moléculas exógenas, presentes no meio externo. Um progresso significante tem sido obtido adotando a hipótese de que um destes rearranjos consiste na formação de canais aquosos temporários (“poros”), por um campo elétrico, capazes de potencializar o transporte iônico e molecular através da membrana. Isto faz com que a molécula de DNA que é negativa entre para dentro da célula bacteriana.

Procedimentos experimentais

Preparação das soluções

Foi preparado 250ml de solução glicerol 10%, para lavagem das células antes da eletroporação. Preparou-se uma solução de Cloreto de Calcio 0,1M, para possibilitar a transformação de células quimiocompetentes. O meio de cultivo