Espectofotometria-Bioquimica

Espectrofotometria

O que é espectrofotometria?

A espectrofotometria é uma técnica analítica que avalia a capacidade dos solutos absorverem luz em comprimentos de onda específicos. A medida da luz absorvida permite inferir sobre a concentração do soluto em determinada solução ou material biológico.

É uma técnica bastante específica e muito sensível.

Fundamentos Teóricos
Radiação eletromagnética
A luz é uma forma de radiação eletromagnética que pode ser descrita: ·

Como uma onda constituída por um componente vetor

elétrico e por um componente vetor magnético
·

Como uma série de pacotes discretos de energia (fótons).

Parâmetros de um movimento ondulatório: λ – distância linear entre dois máximos f (ou υ) – número de ondas completas (ciclos) que passam por um dado ponto por segundo número de onda – número de ciclos por cm.

Velocidade, frequência e comprimento de onda se relacionam pela expressão: c: velocidade da luz (m/s)

(1)

f: freqüência (ciclos/s ou Hz) λ: comprimento de onda (m)

A velocidade de propagação das ondas é diretamente proporcional à sua frequência.

Teoria de Planck e Espectro Eletromagnético:
Relaciona as duas abordagens, ondulatória e corpuscular: constante de Planck = 6,62 x 10-27 erg.s

(2)

Combinando equações anteriores (1) e (2):

E = h f = h.c = h c λ-1 λ A energia associada com uma forma de onda em particular é diretamente proporcional à frequência da radiação e consequentemente inversamente relacionada ao comprimento de onda.

Espectro Eletromagnético:
(distribuição das radiações eletromagnéticas existentes na natureza pelos seus comprimentos de onda)

• A energia de cada fóton é proporcional à frequência e ao número de onda e inversamente proporcional ao comprimento de onda.
• Um fóton de alta frequência (pequeno λ) tem um conteúdo energético maior do que um de baixa frequência

Espectro eletromagnético:

Absorção de luz pela matéria e escolha do melhor