RELATÓRIO SOBRE A AULA PRÁTICA NO LABORATÓRIO DE BIOQUÍMICA - ESPECTOFOTOMETRIA

RELATÓRIO SOBRE A AULA PRÁTICA NO LABORATÓRIO DE BIOQUÍMICA-07/11/2014

Após a apresentação das vidraria (Balão Volumétrico, Béquer, Erlenmeyer, Funil de haste longa, Pipeta Graduada, Pipetador Automático, Proveta e Tubo de ensaio), foi nos mostrado o aparelho de ESPECTROFOTOMETRIA, que é usado como um dos métodos de dosagem de proteína. Foram usados a teste; a)Clara de ovo (albumina) b)Caseinato de Sódio (caseína) c)Lactossoro (proteína do soro do leite “whey protein”) d)Gelatina (colágeno) Foram dosados 50mcl de cada proteína diluída em 1,5ml do reagente Bradford, com 100mcl de água destilada. Distribuído então as soluções nas provetas, aplica-se também a mesma quantidade de água destilada com o reagente Bradford, para ser utilizado no espectrofotômetro, para zerar o mesmo (que ele faça a leitura sem nenhuma proteína nessa diluição) e traçar a curva de calibração. De acordo com os resultados vistos no espectrofotômetro a diferença da densidade através da absorção de luz em cada amostra;
(resultados)

Gelatina: 0,229 0,253 0,236 Colágeno.
Clara do Ovo: 0,771 0,821 0,796 Albumina.
Caseína 0,298 0,250 0,286 Fosfoproteína.
Lactosoro 0,523 0,557 0,574 Proteinas globulares.

É necessário utilizar proteína total com concentração conhecida para ser feita a curva de calibração e mensurar a concentração não conhecida

Técnicas Reação do biureto - Em um tubo de ensaio colocar 1,0 mL do reagente de biureto + 0,5 mL da solução de proteínas. Comparar a cor desenvolvida contra um branco. Reação da ninhidrina – Em um tubo de ensaio colocar 2,0 mL da solução de ninhidrina + 0,2 mL da solução de proteínas. Ferver durante cinco minutos comparar contra um branco. Desnaturação Térmica - Em um tubo de ensaio colocar 2,0 mL da solução de proteínas. Levar a chama até a fervura. Observar; separar o sobrenadante (se houver) adicionar o tampão ao precipitado e agitar. Desnaturação ácida – Em um tubo de centrífuga colocar: 1,0 mL de